应用广场——ÄKTAFPLC  
 
 
常用在线层析柱
SuperdexTM  S200 HR 10/30 凝胶过滤/分子排阻
Mono QTM  HR 5/5 阴离子交换
Mono STM HR 5/5 阳离子交换
RESOURCETM  HIC Eth 疏水层析 (弱)
RESOURCE HIC Iso 疏水层析 (中)
RESOURCE HIC Phe 疏水层析 (强)
XK 16/20柱 专用于用特殊介质填充


这些装配使系统可以提供16种可选择的缓冲液,7种层析柱,280或254 nm紫外吸收,电导,温度,压力和pH在线监测。使用UNICORNTM 软件控制系统和获得数据。

这种配置不仅适合探索和筛选不同实验条件,而且允许众多用户长期在线拥有他们的缓冲液和层析柱。

主要使用者应用的技术和层析实例在表1和所引用的图中概述。

 


结 论
在IGM安装了ÄKTAFPLC,现在大部分纯化科研项目已经使用该系统取得了极大的成功。ÄKTAFPLC运行操作简单,快速并重复性极高。我们获得ÄKTAFPLC之后,那些以前害怕纯化工作的许多同事,现在也更享受做纯化工作了。

 
图2. T.maratima 拓扑异构酶I (topoisomerase I) 能用肝素柱或蔗糖梯度部分纯化,然而会被核酸酶影响。杂质能用uperdexTM 200 HR10/30柱除去。所用样品和峰2 (在级份14中收集) 见电泳图。污染核酸酶活性出现在峰9中。数据来自M.Duguet教授。
 
图3. 一步纯化ATP结合盒[ATP Binding Cassette (ABC)]。ATP酶N-端有多聚组氨酸。柱:XK 16/20填充螯合Ni2+的Chelating Sepharose凝胶。电泳图说明分部收集的所有洗脱峰的ATP酶的纯度水平。缓冲液A:50 mM磷酸钠,10 mM咪唑,1 mM EDTA;缓冲液B:咪唑浓度为1 M的缓冲液A。蓝线=mAU扫描;红线=注射开始和结束;橙线=%缓冲液B。
 
图4. 经过硫酸铵沉淀和透析的鸡卵黄IgY的最后纯化。残留污染的磷脂在用IgY 做蛋白质印迹之前应除去。缓冲液A:50 mMTris-HCl,120 mM NaCl (pH 7.5); 缓冲液B:50 mM Tris-HwCl, 1M NaCl (pH 7.5)。蓝线=mAU 扫描;红线=电导;橙线=%缓冲液B。
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