素有“活化石“之称的银杏是冰川时期的存活在地球上孑遗植物,而中国的银杏占世界资源的70%左右1。银杏中的有效成分包括银杏黄酮、黄酮甙2-3、内酯4、银杏酸4、多糖等5。有报导银杏可抗过敏、预防老年痴呆症、作为减轻焦虑和压力的情绪提升剂、改善失聪以及对心脏病、阳痿、中风、静脉曲张、眩晕、黄斑退化和经前症,均有一定的疗效2,3。
葛根中含有黄豆苷元、黄豆苷、葛根素、7-木糖葛根素,金雀异黄酮,葛雌素及黄豆苷元4,7-二葡萄糖苷等。其中葛根素具有改善心血管循环、降低心肌耗氧量功能,对缺血性心脏血管疾病有治疗效果6,7。最近的研究表明葛根素对视网膜充血、结膜炎也有一定的疗效8。
虽然银杏黄酮、葛根素的纯化方法已有很多报导,但步骤繁多9,10、最终回收率很低。由于这类中草药粗提物中带色素的成份极多,无论使用硅胶、氧化铝或Sephadex
LH-20凝胶精纯,目标产品往往被其它色素成份掩盖,检测追踪极为困难。或经过反复多次层析,目标产品损失极大。针对这一普遍存在的问题,我们采用阴离子交换介质Q
Sepharose FF先吸附大部分色素杂质,再用Pharmadex LH-20 (Sephadex LH-20)
凝胶精纯了银杏黄酮和葛根素,效果事半功倍。我们发现此方法适合不少其它中草药中黄酮类物质的精纯,具有广泛的实际应用意义。
● 原材料
由甘肃药材公司提供,银杏提取物含银杏黄酮纯度40%,葛根提取物含葛根素70%。
● 仪器及试剂
层析设备: ÄKTA explorer 100
层析介质: Q Sepharose FF和Pharmadex LH-20(Sephadex LH-20)
层析柱: HiTrap Q Sepharose FF、XK 26/40和XK26/100
试剂: 乙醇 (分析纯) 氯化钠 (分析纯) Tris (分析纯)
● 实验方法
1. 样品制备:
将含银杏黄酮40%纯度的银杏提取物和含葛根素70%的葛根提取物分别用70%乙醇和无水乙醇各提取一次, |