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| CellTilter-GloTM发光细胞活力检测：快速、灵敏、灵活 |
| Promega公司：Terry Riss, Ph.D, Rich
Moravec, B.S., Michael Beck, M.S., Rita Hannah, Ph.D；新泽西Trenton学院：Karen
Wilson；Pharmacopeia公司：Robert Swanson, Ph.D. |
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摘要：
Promega公司CellTilter-GloTM发光细胞活力测试是一种检测细胞增殖和细胞毒性的高灵敏方法。这种
测试方法采用一种独特的、稳定性荧光素酶来检测有活力细胞的指示剂ATP。产生的发光信号和培养基中 的有活力细胞数呈正比。测试方法的均质性适用于高通量应用，在96孔板、384孔板和1536孔板进行放
大分析时灵敏度没有损失。测试大批量样品可快速得到结果，并且其发光特点使测试分析具有灵活性。 |
| 进行细胞活力测试时，只需将CellTilter-Glo
TM试剂直接加到培养细胞中，排除了反复移取和细胞洗涤步骤。 |
细胞活力测试的工作原理
CellTilter-Glo TM发光细胞活力测试采用荧光素酶检测有活力细胞代谢的指示剂ATP
(1-3)。这种测定方法适用于实验室和高通量有活力的细胞数的测定，包括 细胞增殖和细胞毒性测定以及日益普遍应用的ADME/Tox筛选(吸收、分布、代谢、消除和毒性)。(1)
CellTilter-GloTM试剂是将CellTilter-GloTM冻干粉溶解到CellTilter-GloTM缓冲液中配制成的。CellTilter-
GloTM试剂的终使用体积取决于检测细胞和样品的体 积。测试时将和培养细胞等体积的CellTilter-GloTM
试剂加到培养细胞孔中。快速振荡平板后，用发光仪或CCD相机读取发光信号。表1显示了CellTilter-GloTM测试操作的流程图。只需将CellTiter-GloTM 试剂直接加到培养细胞中，排除了反复移取和细胞洗涤步骤。
加入CellTilter-GloTM试剂并混合，测试分析仅用 10分钟即可得到结果。而其它细胞活力测试需要细胞代谢底物钙黄绿素-AM或四唑产生信号，可见
CellTilter-GloTM测试方法是有优势的。另外CellTilter-GloTM测试不需长时间孵育，能很好显示药物处理后的
细胞活力，特别是在细胞经过短时间处理的情况下。 |
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图1. CellTiter-GloTM发光细胞活力测试操作流程图
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CellTilter-GloTM试剂中的荧光素酶利用荧光素、氧和ATP作为反应底物，产生氧化荧光素，并以光的形式释放能量。由于荧光素酶反应需要ATP，因而反应产生光的总量和反映有活力细胞数的ATP总量呈正比。如图2所示，发光量和细胞数目呈正相关关系。数
据表明在384孔板上CellTiter-GloTM测试可检测4至4000个细胞/孔(p<0.001,线性回归r2值0.99)。在96
孔板上测试线性范围可延伸到50,000个细胞/孔(数据没有显示)。该测试方法的灵敏度和线性范围因细胞而异。
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