普洛麦格中文通讯 2002年第五期
 
 
    图5. 图中显示的细胞系采用CellTiter-GloTM试剂产生的发光信号半衰期大于5个小时。发光信号具有长半衰期，为高通量筛选的连续或 批量测试提供了灵活性。

HepG2、BHK-21、 CHO-K1和SH-SY5Y细胞，尽管细胞类型间ATP绝对数量存在差异，但检测的几种细胞均适用这种方法进行细胞活力测试。 

    图6显示了CellTiter-Glo TM测试的灵活性。图中A是检测TNF α细胞毒性分析板的CCD相机的照片，用发光仪读取的数据显示在图B中。发光仪稍作改造即 可读取CellTiter-GloTM测试的发光信号，即用一不透明的滤片挡住激发光，并移去发射光滤片，使最大量的光通到光倍放器。

由小规模到高通量筛选的可放大性
　　现在越来越多的仪器设计适合384孔板测定，很 多实验室的筛选方法放大到这种规模。这种小规模细胞活力测试要求测试方法具有灵敏、快捷、适用的特点。CellTiter-GloTM发光细胞活力测试符合这些条件。CellTiter-GloTM测试可从96孔板、384孔板放大到1536孔板，适用于小型化及高通量筛选。培养基的体积对测试结果影响很小。1536孔板数据的统计结果 显示Z’因子为0.84，显示了CellTiter-GloTM 测试区分阴性和阳性对照样品的能力(图7)。

试剂的稳定性及抗干扰性
 CellTiter-Glo TM测试试剂如果处理和保存方法得当，可稳定保存6个月。配制的CellTiter-Glo TM试剂在-20℃可保存几个月并可反复冻融(3)。混合后的试剂(缓冲液和底物)若4℃保存48小时，试剂的活性损失

 
    图6. 采用CellTiter-GloTM测试和CellTiter 96® AQueous一种溶液细胞增殖测试系统在384孔板上检测TN F α对L929细胞的细胞毒性。将L929细胞接种到透明底部的384孔分析板上(1000细胞/孔)孵育20小时，贴壁培养24小时。在放射菌素D(终浓度1μg/ml)存在条件下加入不同浓度的TNF α(n=4)，后加入等体积的CellTiter-GloTM试剂(30μl/孔），振动混匀，10分钟后用Berthold® Orion®发光仪记录发光信号，从而测定细胞毒性。在相应的另一个分析板上，每孔加入 6μl CellTiter 96® AQueous一种溶液试剂，37℃培养2小时后，用Wallac VitorTM多标记计数器在490nm吸收值下测量。图A为Alpha Innotech多影像光栅CCD相机拍摄的照片(曝光30秒，中度灵敏度)。图B显示两种测试方法测定的ED50值大概是相等的（约~8pg/ml）。

很小(约5％)，而22℃放置48小时其活性损失20％。 CellTiter-GloTM测试是很有生命力的，加到多孔板上的酚红及用于溶解化学药物的常用有机溶剂对测试没有不良作用。我们已证明常用的药物溶剂如DMSO、丙酮、乙醇对测试没有影响。 

　　细胞培养基中补加的血清可影响荧光素酶测试。当CellTiter-GloTM测试采用不同的细胞培养基和血清时，可观察到发光强度的细微变化。为保证测试分析的一致性，测试时应采用相同的培养基配方及血清。

温度对发光信号的影响
CellTiter-GloTM测试发光信号强度依赖于荧光素酶的反应速率。温度可影响酶反应速率，是发光量的一个影响因素。我们建议在记录发光信号前将分析板恒温放置在22℃，以确保结果的一致性。将真核细胞从37℃转移到22℃环境下对ATP含量有细微影响。我们 将培养细胞从37℃转移到22℃平衡1小时后再加入

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