Promega公司T-载体系统之间的差异是什么？
　　Promega公司pGEM^® -T载体系统(产品目录号：A3600和A3610)及pGEM^®-T Easy载体系统(产品目录号：A1360和A1380)适用于很多一般性克隆。 pGEM^®-T载体和pGEM^®-T Easy载体是高拷贝质粒，包含T7和SP6 RNA聚合酶启动子侧翼多克隆区。启动子位点既有利于插入片段的测序，也有利于体外转 录正义或反义RNA。这两个载体的多克隆区位于β－半乳糖苷酶α肽编码区内，因而可用蓝白斑筛选阳性克隆。多克隆位点区包括很多酶切位点，这有利于基因的亚克隆及其它应用。另外pGEM^®-T载体和pGEM^®-T Easy载体还包含BstZI酶切位点，用BstZI单酶切消化即可释放克隆的插入片断。pGEM^®-T Easy载体的EcoRI和NotI酶切位点也具有同样的功效。

Promega公司PinPoint TM Xa-1 T-载体系统(产品目录号：V2610)设计用来克隆并在大肠杆菌中表达 PCR产物。克隆PCR产物的编码序列与一个纯化标签序列位于一个读码框中，这样在大肠杆菌中表达的蛋白被生物素化，易于用亲和层析纯化蛋白。载体还包含一个蛋白内切酶Factor Xa剪切序列，用于将表达蛋白除去纯化标签。另外这个载体包含很多酶切位 点，以利于将插入片段进行亚克隆，并且该系统包含一个插入片段阳性对照，可通过蓝白斑筛选鉴定系统功能。 

　　Promega公司pTARGETTM真核细胞表达载体系统 (产品目录号：A1410)是设计用来在真核细胞中表达克隆的PCR产物的。pT ARGET^TM载体包含巨细胞病毒立即早期增强子/启动子，可启动基因在多种细胞中高水 平表达。这个载体还包含一个新霉素磷酸转移酶基因(Neo)，可用抗生素G-418筛选细胞稳定表达株。另外该载体在编码区包含多克隆酶切位点及蓝白斑筛选特征。 

　　若需要了解Promega公司T-载体系统更多的信息，请参考产品的技术手册(1-3)。

DNA聚合酶的选择对T-载体克隆效率有何影响？
　　采用T-载体克隆PCR产物，应特别注意使用的DNA聚合酶是否具有3'-5'核酸外切酶活性，即酶的校正活性。嗜热菌DNA聚合酶没有校正活性，在PCR产物3'末端以非模板依赖方式加上一个腺苷酸残基，这样PCR产物的3'腺苷酸可和T-载体的3'胸腺嘧啶 互补，T-载体系统进行有效连接的基础正是这种碱基配对作用。相反，有校正活性的聚合酶将移去这个3' 突出端，产生平端PCR产物，这种产物不能直接用T-载体系统进行克隆。对于平端PCR产物以及其它酶作用产生的平端DNA片段，可根据pGEM^®-T和pGEM^®-T Easy技术手册TM042方法进行T-载体克隆。