微阵列的结果,Pronto

Proton®TM Plus系统: 提高微阵列的重现性,可信度及易用性
Corning公司: Michael W. Briggs, Ph. D., Promega公司: Nadine Nassif, M. S.

  原文在 Promega Notes 86第 2-5
     

 

接参入Cy®标记的核苷酸来标记。结果证明在微阵列实验中Proton!TM Plus系统及操作手册为得到优良的可重复的信号检测及更可靠的数据阐述,提供了框架。

SV 总RNA 的提取
  Proton!TM Plus系统中SV总RNA提取系统组份使用亲和分离的方法来得到高质量的总RNA (图1)。将细胞裂解缓冲液中后,RNA便被硅基质沉淀及捕获。用DNA 酶1处理,以除去样品中的染色体DNA(1)。 RNA的纯化不需要使用酚/氯仿抽提或酒精沉淀,并且最终的RNA中没有DNA 酶的残留 (1)。该分离系统为从组织,培养的

图1. 使用安捷伦2100生物分析仪测定的用SV RNA 的提取系统从 Hela 细胞中分离到的总RNA的质量及纯度。用SV RNA 的提取系统分离到的总RNA中的真核细胞核糖体RNA 28S 与18S 的比值介于1.5到2.5 之间,表明RNA的完整性适合于分子生物学分析。具有比值(28S/18S)=2.13 的总RNA是使用Proton!TM Plus系统的技术手册中所述方法从2 x106 Hela细胞中分离到的。

细胞及白细胞中制备纯化完整的总RNA提供了快速而简单的方法。产量依样品而不同(表1),一般而言,使用SV 总RNA 提取系统提取一次的总RNA产量足够多个cDNA标记反应。

ChipShotTM 标记及标记物的纯化
    ChipShotTM 标记系统允许使用者在反转录反应中直接掺入Cy®标记的核苷酸以得到荧光标记的cDNA。ChipShotTM 标记系统可以从小量的总RNA或 mRNA 模板制备标记的cDNA。使用总RNA做模板时,只需要5μg,而许多其它的商用系统则需要15-20μg模板。使用mRNA时,只需要1.5μg模板。从mRNA或总RNA标记cDNA需要不同的脱氧核糖核苷酸混合物及不同

 

摘 要
由康宁公司与普洛麦格公司共同开发的 Proton!TM Plus系统,是将微阵列各组份完全整合在一起的完整系统。该系统提供了微阵列应用所需的各种试剂及操作手册,包括RNA分离, cDNA标记,cDNA的纯化,杂交液,及UltraGAPSTM 载片 。这一完整系统的质量及一致性可以保证在实验室之内及实验室之间都能够得到一致的微阵列数据。另外,这一整和的系统使得从单一渠道获得微阵列各组份非常方便。

Pronto!TM Plus 系统给您一个经过优化的、整合的全套试剂和操作手册,使您拥有一个通用的、从头到尾的微阵列分析解决方案。

前言
    微阵列是一种强有力的工具,为生物学家提供了监测全部的转录子及评价同时表达的数千种基因的可能。为了得到可用的数据,必须注意许多单独的并且相关的步骤。
  现有的许多微阵列操作手册需要将多家公司的试剂组合在一起,或者需要使用者自己准备试剂,这使标准化非常困难。但是,Proton!TM Plus系统通过整和试剂及操作手册为使用者提供了通用的,从头至尾的微阵列分析的解决方案。通过提供最优化的,标准化的所有必需组份{Cy®-标记的核苷酸除外}, Proton!TM Plus系统使用户能够得到高重复性的微阵列实验结果。
  
  在本文描述的实验中,人的cDNA 微阵列被印记于 UltraGAPSTM 载片,用于评价靶标记及微阵列杂交的各个参数。使用Proton!TM Plus系统的ChipshotTM 标记及纯化组分从5μg总RNA 中得到标记的cDNA。靶cDNA用直