接参入Cy®标记的核苷酸来标记。结果证明在微阵列实验中Proton!TM
Plus系统及操作手册为得到优良的可重复的信号检测及更可靠的数据阐述,提供了框架。
SV 总RNA 的提取
Proton!TM Plus系统中SV总RNA提取系统组份使用亲和分离的方法来得到高质量的总RNA
(图1)。将细胞裂解缓冲液中后,RNA便被硅基质沉淀及捕获。用DNA 酶1处理,以除去样品中的染色体DNA(1)。
RNA的纯化不需要使用酚/氯仿抽提或酒精沉淀,并且最终的RNA中没有DNA 酶的残留 (1)。该分离系统为从组织,培养的
图1. 使用安捷伦2100生物分析仪测定的用SV
RNA 的提取系统从 Hela 细胞中分离到的总RNA的质量及纯度。用SV RNA 的提取系统分离到的总RNA中的真核细胞核糖体RNA
28S 与18S 的比值介于1.5到2.5 之间,表明RNA的完整性适合于分子生物学分析。具有比值(28S/18S)=2.13
的总RNA是使用Proton!TM Plus系统的技术手册中所述方法从2 x106
Hela细胞中分离到的。
细胞及白细胞中制备纯化完整的总RNA提供了快速而简单的方法。产量依样品而不同(表1),一般而言,使用SV
总RNA 提取系统提取一次的总RNA产量足够多个cDNA标记反应。
ChipShotTM
标记及标记物的纯化
ChipShotTM 标记系统允许使用者在反转录反应中直接掺入Cy®标记的核苷酸以得到荧光标记的cDNA。ChipShotTM
标记系统可以从小量的总RNA或 mRNA 模板制备标记的cDNA。使用总RNA做模板时,只需要5μg,而许多其它的商用系统则需要15-20μg模板。使用mRNA时,只需要1.5μg模板。从mRNA或总RNA标记cDNA需要不同的脱氧核糖核苷酸混合物及不同 |