图2.70℃ 时对核糖核酸酶的抑制。于70℃ 加热分别装有RNasin^® 核糖核酸酶抑制剂和核糖核酸酶的试管（泳道1，3及5）15分钟；于70℃ 加热混合了RNasin^® 核糖核酸酶抑制剂和核糖核酸酶的试管（泳道2，4及6）15分钟。在每组反应中，分别加入不同量的荧光素酶对照RNA(产品目录号: L4561): 1μg (泳道1和2); 100ng (泳道3和4); 或10ng (泳道5和6)。这些反应产物或者37℃ 保存1小时(泳道3-6)，或者直接使用AccessQuick^TM RT-PCR系统（产品目录号: A1702）扩增全长的1.8 kb片段。凝胶显示 RT-PCR 的扩增产物。泳道1和２使用了40u RNasin^® 核糖核酸酶抑制剂及20ng核糖核酸酶A（产品目录号: A7973）。泳道3至6使用了400u RNasin^® 核糖核酸酶抑制剂及1.25μg　浓度为0.5μg/μl　大鼠肝脏蛋白提取物水溶液（参考文献２）。有关RNasin^® 核糖核酸酶抑制剂稳定性的其它信息可参阅参考文献２。

核糖核酸酶会通过难以预料的途径进入反应，因此，核糖核酸酶抑制剂必须在引入的核糖核酸酶与抑制核糖核酸酶之间没有滞后地快速起效。RNasin^® 核糖核酸酶抑制剂对核糖核酸酶具有极高的亲和常数，因此可以几乎瞬间起效。低亲和常数的核糖核酸酶抑制剂，如SUPERase . In^® , 不能快速起效，特别是对痕量核糖核酸酶。图 3 的数据显示，在引入核糖核酸酶与抑制核糖核酸酶之间低亲和常数的核糖核酸酶抑制剂存在滞后。

　　因为RNasin^® 核糖核酸酶抑制剂符合以上的所有标准，所以它成为以RNA为基础的应用的理想抑制剂。它保护RNA而本身没有核糖核酸酶的污染。它与许多种以

图3.“预温育”及“实验中”条件下，RNasin^® 核糖核酸酶抑制剂与SUPERase . In^TM 抑制剂抑制核糖核酸酶A活性的比较。在含有50 mM MOPS和 5mM MgCl₂（ PH6.5）的0.5ml 反应体系中，将酵母总RNA与5ng核糖核酸酶A于37℃ 温育15分钟。如图所示，加入或不加核糖核酸酶抑制剂。温育后加入0.5 ml 10% TCA终止反应并沉淀大RNA分子。测定TCA可溶物的OD₂₈₀。对于预温育实验，核糖核酸酶抑制剂与核糖核酸酶混合并于22℃ 温育15分钟。然后将预温育混合物加入RNA中（4）。

参考文献
1. Shultz, J., Hurst, R. and Betz, N. (2001) RNasin^® Ribonuclease Inhibitor Part I: Characterization of the protein. Promega Notes 77, 8-11.
2. Andrew, C., Huang, F. and Shultz, J. (2003) RNasin^® Plus Rnase Inhibitor: New protein for high temperature RNase Inhibition. ENotes (http://www.promga.com/enotes/applications/ap049_tabs.htm )
3. Schink, M., Mei, B. and Lepinske, M. (1997) A comparison of ribonuclease inhibitors. Promega Notes 61, 30-2.
4. Shultz, L., et al. (2002) RNasin^® Ribonuclease Inhibitor Part II: A tale of two proteins. Promega Notes 77, 12-5.