消除荧光干扰的ProFluorTM Src-家族激酶的荧光检测
ProFluorTM Src-家族激酶实验在多孔板中使用“加样-混合-读数”方式测定Src-家族酪氨酸激酶（例如：Src,
Lck, Fyn, Lyn, 及Hck ）纯化蛋白的活性。利用本实验提供双酰胺罗丹明110肽底物（Src-家族酪氨酸激酶R110底物）及区别抑制该酶的化合物的
AMC 作为对照，可以进行标准的激酶反应。在此包装中，激酶 R110底物及AMC 底物都是非荧光的。
激酶反应后，同时加入蛋白酶溶液以终止反应。完全降解的罗丹明110底物和AMC底物，产生罗丹明110及
AMC发出强荧光 。磷酸化的激酶 R110底物抵抗蛋白酶的降解而保持非荧光状态。因此，实验中测定的R110荧光强度与蛋白酶的激酶活性成反比，而
AMC荧光强度做为蛋白酶活性的指标。本实验在96孔板及384孔板中均能得出极佳的Z’
|
|
因子并可轻易地区别已知的激酶 抑制剂和其它化合物。
系统优势
- 得到高确定性的结果：在96孔板及384孔板中，Z’因子的数值均大于0.8。
- 可观察到微弱的化合物干扰：底物的浓度为微摩尔级。产生的罗丹明110荧光信号大大强于被检测物发出的荧光。
- 包含对照肽：对照肽用于监测蛋白酶活性。降低假阳性。
- 均质：与其它激酶实验相比，简单的“加样-混合-读数”方式减少了操作多孔板的次数。
- 省时：与其它激酶实验的繁多步骤及长时间温育相比，用时更少。
- 无辐射：无放射性废物处理及安全问题。
|
