具有超级灵敏度的均质Caspase(半光氨酸天冬氨酰蛋白酶)实验
Caspase-GloTM
8和9实验系统用于检测Caspase- 8和Caspase-9活性的发光实验。这些实验优化的裂解液中的发光前底物(Caspase-
8- LETD 荧光素;Caspase- 9-LEHD 荧光素)为基础。以“加样-混合-读数”模式加入Caspase-GloTM试剂裂解细胞并将底物呈现给有活性的Caspase酶。切割底物释放出游离的荧光素,荧光素在荧光素酶的作用下发光,.发出的荧光与被检测的Caspase酶活性成比例。持续的发光信号允许实验后的3-4小时读取数据。Caspase-GloTM
实验依赖于热稳定的荧光素酶的独有特性,Ultra-GloTM 与独特的缓冲液系统组合提高了其在广泛实验条件下的表现,而且,与其它以荧光-,染色-或发光为基础的实验相比,较少受化合物干扰的影响。Caspase-GloTM
实验可以在多孔板上用纯化的酶或培养细胞测定细胞凋亡IC50或EC50值。比传统的AFC底物有更卓越的表现。
利用Caspase-GloTM 实验得出的信号具有较宽的动态线形范围。在本例中,重组的Caspase-8系列倍比稀释于10nM
HEPES, PH7.5, 0.1% Pronex中。Caspase-GloTM试剂或
Ac-LETD-AFC底物稀释于加入DTT 的Caspase-GloTM 缓冲液,以等体积加入到孔中。1小时后,用
BMG Fluorostar或 Cytofluor®II 测定各自的发光或荧光。方形线表示每个实验检测出的信噪比极限。 |
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系统优势
- 简化细胞凋亡或Caspase的检测:只需简单地将等体积的试剂加入样品,“加样-混合-读数”的操作模式使得实验容易实现自动化。本实验在贝克曼库尔特
BioMek®2000及FX工作站上可用96孔板及384孔板实现自动化。
- 只需少量的酶或较少的细胞:与其它以荧光-,染色-或发光为基础的实验相比, Caspase-GloTM系统更灵敏而且可以避免内源荧光信号的干扰,因而提供了极强的信噪比,有利于用较少的细胞监测细胞凋亡或用较少纯化的Caspase
筛选Caspase抑制剂。
- 节省实验时间:无需准备样品,并无需象以荧光为基础的实验一样延长培养时间。只需少至0.25-1小时,即可达到最大灵敏度。
- 可信赖的性能检测实验:Caspase-GloTM 实验在细胞及纯化的酶模型中都能给出极佳的Z’
因子。Z’因子是一个用来评价实验质量的实验数据变化的动态范围的统计学数值。Z’因子的数值大于0.5则表示实验质量无可挑剔。
- 适于成批操作:持续的发光信号允许实验后的3-4小时读取数据,有利于成批操作,而无需进样器。
- 选择Caspase 8或9的活性: Caspase-GloTM 实验使用被证明对Caspase
8或9具有选择性的发光底物,与优化的缓冲液结合,可以有选择地检测Caspase 8或9的活性。
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