普洛麦格中文通讯 2002年第五期

　　图5. 三种已知抗病毒化合物的剂量反应曲线。细胞病变效应(CPE) 抑制实验采用上述CellTiter 96^® AQ_ueous 单溶液系统。结果中，化合物的毒性表示为相对于细胞对照组的活性百分比，化合物的效应以CPE 降低量的百分数来表示。三种化合物均可减轻病毒诱导的细胞病变效应，并具有浓度依赖性。此外，这些化合物在本实验的浓度范围内毒性很小(即100%细胞活性)。图A：药物--叠氮胸苷(AZT)，病毒--人免疫缺陷病毒1型株(HIV1-RF)。图B：药物--无环鸟苷，病毒--人疱疹病毒2型(HSV-2)。图C：药物--甘环鸟苷，病毒--巨细胞病毒 AD169株(CMV AD169)。

　　图6. 384孔和96孔培养板的细胞毒性分析比较。取对数生长期的小鼠杂交瘤细胞离心收集，重悬于含10%小牛血清的F12/DME培养基中。将细胞分别加入Corning^® 96孔和384孔组织培养板，96孔板每孔的终体积为90ml(45,000个细胞/孔)，384孔板每孔的终体积为35 ml(17,500个细胞/孔)。培养的细胞以溶于培养基的不同稀释度的Triton ^®×100处理(杀死细胞)，384孔板内每孔加入4ml，96孔板内每孔加入 10ml。向培养板内加入CellTiter 96^® AQ_ueous 单溶液试剂(384孔板内每孔加入8ml，96孔板内每孔加入20 ml)，将培养板置于37℃、5%CO2培养箱中孵育4小时。吸光度以Wallac TM 1420 VICTOR2^TM 平板读数计测定。吸收值为每组4个复孔的均数±标准差。

讨论

　　CellTiter 96^® AQ_ueous单溶液分析试剂盒使我们得以进行更快、更好的高通量筛选。可溶的甲 (formazan)使试验过程成为简单的“加样-读数”模式，无需去除培养基或对样品进行其它处理，因而提高了效率和筛选通量，同时降低了培养孔之间的差异。CellTiter 96^® AQ_ueous单溶液分析试剂盒亦可使用384孔板，可保持96孔板的性能(图6)。这篇文章讲述的过程表明CellTiter 96^® AQ_ueous单溶液分析试剂盒是在高通量背景中确定受试化合物抗病毒活性和细胞毒性的有效工具。

参考文献：1. Barltrop, J.A. et al. (1991) Bioorg. & Med. Chem. Lett. 1, 611.2. Riss, T. and Moravec, R. (1998) Promega Notes 69, 15.