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| 图2. 单剂量抗病毒化合物测试的培养板布局。 颜色对照组用于测定药物本身引起的本底吸光度，该值应在相应的效应组和毒性组的吸光度值中被扣除。毒性对照组用来区分抗病毒活性和药物毒性。细胞对照组用于测定未经处理的细胞的吸光度，相当于100%的细胞活力。病毒对照组用于测定被病毒杀死的细胞的吸光度，相当于0%的细胞活力。培养基对照组用于测定培养基的本底吸光度。效应组测定的是药物效应，表示为对照组细胞活力的百分比。 |
CPE抑制由Promega公司的CellTiter 96® AQueous
单溶液检测试剂盒(目录号G3580和G3581)进行的细胞活力分析来确定。这一分析方法测量的是细胞活力，因为在活性细胞内，脱氢酶产生的NADH和NADPH可将MTS四唑化合物生物还原为甲
(formazan)(1，图3)。将CellTiter 96®; AQueous
单溶液试剂加入每个培养孔(占培养孔总体积的10%)，将培养板置于37℃ 环境中孵育，直至充分显色(通常为2-6小时，取决于细胞系)。应用分光光度计于490nm处测量紫色的甲
(formazan)产物，参比波长为650nm。每孔的光密度(OD)值是所产生的甲 (formazan)量的函数，与活性细胞数量成正比(2)。
对于在单剂量测试时显示出活性的化合物将对其做进一步评价，做出剂量反应曲线，该曲线可被用于测算半数抑制浓度IC
50(可产生50%抑制病毒诱导的细胞死亡效应的化合物的浓度)和半数毒性浓度TC 50(单独作用时，可
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| 导致50%未感染细胞死亡的化合物的浓度)。应用于剂量反应曲线检测试验的培养板布局见图 4。这里显示的是对照化合物拮抗HIV-1、HSV-2和CMV病毒的典型结果(图5，A-C)。
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| 图3. 细胞内MTS转化为甲(formazan)产物的代谢示意图。据认为代谢活性细胞中的脱氢酶产生还原性等价物如NADH或NADPH
的反应是导致MTS被还原为甲(formazan)产物的主要原因。 NADH可以将其电子转移给电子传递剂(ERT)，如甲硫吩嗪(PMS)或乙硫吩嗪(PES)，使得上述物质被还原。然后，还原态的电子传递剂可直接还原MTS，产生深色的甲(formazan)产物。
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图4. 抗病毒化合物剂量反应曲线测试的培养板布局 。对照如图2描述。在指定的培养孔中化合物的浓度由高到低排列。
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