普洛麦格中文通讯 第七期 2003

新 产 品           

  RNA 干扰
siLentGeneTM U6 盒RNA干扰系统
产品
包装
目录号
数量
siLentGeneTM U6 Cassette RNA Interference System
1
C7800
1
每个系统足够做20次150ml扩增反应和评估10个siRNA序列。


一种进行干扰的新方法


  预测一个对目标基因表达具有抑制效应的 siRNA是不可能的。所以对于每一个目标基因,常常筛选3-5个不同的siRNA。这种筛选可采用昂贵的RNA合成或费时的DNA克隆方法。而siLentGene TM U6盒 RNA干扰系统可避免这些问题,可快速、简易地筛选多种siRNA序列。

siLentGeneTM U6 盒 RNA干扰系统包括在U6启动子序列和特异的U6聚合酶终止子的控制下,siRNA序列产生、纯化和转染所需的试剂。这种设计使带有推荐3'添加端的精确干扰性RNA能够转录。 

  该系统提供了U6 盒 DNA,在上游引物存在时它可作为PCR反应的模板,也可由使用者自备的下游引物进行PCR反应。下游引物包括3个部分:U6 盒式结合域、能转录特定siRNA序列区域和U6终止子序列。 

  结果产生的PCR产物,即U6表达盒包括U6启动子、目标序列或其互补序列及终止序列。使用该系统需要制备两

 
 

个表达盒,一个表达反义siRNA,一个表达正义siRNA。在经过柱纯化后,两个盒进行混合,而后采用siLentGeneTM 转染试剂转染到适当的细胞株中。 转染细胞后,内源性U6聚合酶以每种PCR产物为模板转录一个短RNA链。转录产生的RNA链互补,退火后可形成siRNA双链。从而在细胞中形成 siRNA/RISC复合物,引起特异目标mRNA的降解。RNA干扰的效果可用多种方法进行检测。


系统优势

● 可简便地产生很多目标:在几小时内产生不同的 U6表达盒以评估各种siRNA。
● 省钱:使用DNA寡聚物,是dsRNA寡聚物成本的 1/4。
● 省力:不需制备转染级质粒或筛选插入子。
● 不需进行克隆而具有同等的抑制效应:经观察和 U6载体系统具有相同的抑制效应。
● 便于使用:以DNA为基础,不需处理RNA。

   

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