普洛麦格中文通讯 2002年第五期

前，培养板可在环境温度下存放至24小时。

采用CellTiter-Blue^TM 检测系统测得的IC50与Promega公司的其它细胞增殖、细胞毒性检测系统所获得的IC50值的相关性如何？

　　CellTiter 96^® AQ_ueous单溶液检测系统采用使四唑盐MTS还原为有色的甲 (formazan)来检测细胞活性，已有数据表明，CellTiter-Blue^TM 系统的检测结果与 96^® AQ_ueous 单溶液检测系统的检测结果具有相关性。同时，CellTiter-Blue^TM 系统的检测结果与基于测量ATP水平的CellTiter-Glo^® 荧光细胞活性检测系统的结果亦具有相关性。例如，当HepG2细胞暴露于递增浓度的他莫西酚时，用上述三种检测系统测得的IC 50值是相似的。乳酸脱氢酶(LDH)是质膜完整性的标志，也是检测细胞毒性的指标，CytoTox-ONE^TM 均质细胞膜完整性检测系统测量的即是乳酸脱氢酶(LDH)。实验数据显示，CellTiter-Blue^TM 系统与CytoTox- ONE^TM 均质细胞膜完整性检测系统之间也存在相关性，刃天青的被还原程度与LDH的释放量成负相关。

在细胞毒性检测和细胞活性检测中，刃天青是怎样被还原的？ 

　　在CytoTox-ONE^TM 均质细胞膜完整性检测系统和 CellTiter-Blue^TM细胞活性系统的组分中都包含有刃天青，但是刃天青在两个系统中的形成方式却不相同。CytoTox-ONE^TM 均质细胞膜完整性检测系统检测的是从胞膜受损的细胞内释放到培养基中的乳酸脱氢酶 (LDH)。LDH经过一偶联的酶促反应使得刃天青转化为试卤灵(4)。

在CytoTox-ONE^TM 均质细胞膜完整性检测的操作说明中，推荐的反应条件是提供过量的LDH的底物(乳酸和NAD+)来提高反应速率。在环境温度下孵育10分钟，活性细胞群体对刃天青的还原量可以忽略，活性细胞对照组的荧光强度仅有轻微的增加(4)。在 CellTiter-Blue^TM试剂中不含有偶联试剂来驱动LDH还原刃天青，因而，从死细胞和受损细胞中释放的LDH不会干扰实验结果。

我怎样控制细胞培养物的组分或者受试化合物对CellTiter-Blue^TM细胞活性检测的潜在影响？ 　　

每一实验均应设立恰当的对照组以确认细胞培养体系中的任何组分是否对测试结果产生影响。建议的对照组包括：溶媒对照-检测溶剂对测试的影响；无细胞的阴性对照—检测背景；细胞毒性的阳性对照；受试化合物对照—检测受试化合物自身还原刃天青的程度或其对荧光检测的干扰。

参考文献：

1. CellTiter-Blue^TM Cell Viability Assay Technical Bulletin TB317, Promega Corporation.
2. Moravec, R. and Riss, T. (2002) Cell Notes 5, 12-14.
3. Riss, T. and Moravec, R. (2003) Promega Notes 83, 10-13.
4. Cyto Tox-ONETM Homogeneous Membrane Integrity Assay Technical Bulletin TB306, Promega Corporation.