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| 图5：采用Chroma-LucTM技术同时监控两个启动子。CRE或NF-κB同源序列分别克隆到pCBG99-Basic载体（产品目录号：E1431）或pCBR-Basic载体（产品目录号：E1411）中。将构建的质粒pCRE-CBG99luc和pNFκB-CBRluc转染293细胞。转染后24小时用以下3种方式的一种处理细胞：ISO(1μM)/RO(100μM), TNFα(0.1μg/ml) /RO(100μM), 或ISO(1μM)/RO(100μM)/ TNFα(0.1μg/ml)。对照孔只加入RO(100μM)。细胞处理6小时后，收获细胞并用Chroma-GloTM试剂处理细胞。采用含有红色滤光片（600 long pass）和绿色滤光片（510/60）的MithrasLB940仪器（Berthold Technologies公司）检测相对荧光强度。用Chroma-Luc算器(www.promega.com/chromacalc)计算红色和绿色信号。将处理样品的发光值除以RO对照值得到诱导倍数。（RO(RO-0-1724)是一种焦磷酸化酶抑制剂，可延长cAMP信号）。 |
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基因CBG99luc和NFκB（核因子kappa B）同源序列偶联，可被TNFα激活。而另一个质粒中红色荧光素酶基因CBGluc和CRE序列相连（cAMP反应因子），可被去甲肾上腺素(ISO)激活。将两种质粒转染细胞可进行报告基因的表达分析。结果显示，绿色荧光可被添加在培养基中的TNFα特异激活，而红色荧光能被加
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入的ISO特异激活，当同时加入TNFα和ISO时，则两种荧光素酶的表达均被激活。另外，两种报告基因共同被激活时的幅度和单一报告基因被分别激活时的幅度是相似的。
结论
Chroma-LucTM技术由发射红光和绿光的荧光素酶，以及一种优化的检测试剂组成，可同时对两种颜色进行定量。这是一种较理想的共报告系统，因为报告基因酶的结构是高度相似的（98％序列同源性）。特别是当CBG99luc和CBRluc共用时，报告基因DNA和mRNA结构也高度相似。
Chroma-LucTM基因群已进行优化，可以在哺乳动物细胞中高表达，和原本的报告基因一样有较高的灵敏度，且伪带表达的可能性低。当两种报告基因共转染时，它们的表达互不影响，可在细胞中分别检测不同的生理过程。当需要使用具有相似结构的可区分的报告基因，或只加入一种试剂测试两种报告基因时，这项技术是非常有用的。Chroma－GloTM试剂可用于Chroma-LucTM报告基因的均质分析，适用于多孔板和高通量应用中进行快速定量分析。
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操作手册
* Chroma-LucTM Reporter Vectors Technical Manual TM059
Promega Corporation
(www.promega.com tbs tm059
tm059.html)
* Chroma-GloTM Luciferase Assay System Technical Manual TM062
Promega Corporation
(www.promega.com/tbs/tm062/tm062.html)
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