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产量高而低本底
大多数商品化试剂盒中，镊颗粒结合蛋白的能力仅为300μg/ml。Promega公司的MagneHisTM 镊颗粒的结合能力高达1mg/ml，这一高结合能力提供了纯化组氨酸标记蛋白的一个经济的方法。
纯化组氨酸标记蛋白的另一重要方面是减少非特异性蛋白的结合。这一点对低表达的组氨酸标记蛋白尤其重要。图2显示了表达量较低的组氨酸标记的RNase HⅠ蛋白的纯化结果。甚至在这样低的表达水平，MagneHisTM 镊颗粒也可以对目标蛋白进行纯化，且非特异结合的背景被减到最小。
每一批次的MagneHisTM 镊颗粒均需进行非特异蛋白结合的检定。应用不含有组氨酸标记蛋白的大肠杆菌裂解液，我们建立了一个特别的质量控制系统（图3）。在该检测方法中，非特异结合<10%。
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图2. 低表达水平的组氨酸标记蛋白RNase HⅠ的纯化。将表达组氨酸标记蛋白RNase HⅠ的培养物离心，13,000×g, 10分钟。去除上清，将沉淀物冻存于-70℃。用MagneHisTM 细胞裂解试剂重悬细胞团，室温下震荡孵育10分钟。离心，13,000×g, 10分钟。取200μl 上清加入到30μl MagneHisTM 镊颗粒中。吹打混匀，室温孵育2分钟。将上述反应体系置于磁力架上，收集上清。用含100mM HEPES，10mM 咪唑[pH 7.5]的MagneHisTM 结合/洗涤缓冲液将镊颗粒洗涤3次。再用100μl
MagneHisTM 洗脱缓冲液（100mM HEPES，500mM 咪唑[pH 7.5]）洗脱组氨酸标记的RNase HⅠ。用SDS-PAGE分析样品，以GelCode Blue显色。
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一种分析和纯化组氨酸标记蛋白的快速方法
当处理多个样品时，使用超声和French Press来裂解细胞就显得很麻烦。使用溶菌酶则需使裂解步骤延长30分钟。Promega公司的MagneHisTM
细胞裂解试剂除掉了不必要的处理步骤，减少了裂解细胞所需
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图3. 镊颗粒的低非特异性结合特性。将E. Coli. S30 提取物用MagneHisTM 结合/洗脱缓冲液进行1：10稀释。取100μl 加入30μl
MagneHisTM 镊颗粒中。按图2所示进行蛋白纯化。用SDS-PAGE分析样品，以GelCode Blue显色。
的时间。将细胞迅速离心，用MagneHisTM
细胞裂解试剂重悬细胞团，经10分钟孵育，细胞即可被完全裂解。
细胞被裂解后，大多数试剂盒的操作说明都建议在使蛋白结合到镊颗粒上之前要去除细胞碎片。这样做会增加耗时，尤其是在一次同时处理多个样品时。使用MagneHisTM 细胞裂解试剂时，则通常不需要在加入MagneHisTM 镊颗粒之前去除细胞碎片（图4）
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图4. 离心纯化和不离心纯化。将MagneHisTM 细胞裂解缓冲液加入表达组氨酸标记的甲基化tRNA合成酶的细胞团，室温震荡孵育10分钟。裂解物或者直接用于MagneHisTM 纯化，或者经离心去除细胞碎片，取其上清用于MagneHisTM 纯化。按图2所示进行蛋白纯化。用SDS-PAGE分析样品，以GelCode Blue显色。
组氨酸标记蛋白的大规模纯化
为了描述一个组氨酸标记的重组蛋白的特征，通常是对几个克隆进行小规模（如：1ml培养体系）的初步筛选，以找到最佳表达的克隆。有时需要对表达进行进一步纯化（如改变宿主菌株或改变生长条件）。
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