※ T7噬菌体展示系统与M13系统有什么区别？
M13和T7噬菌体最大的区别就在于成熟病毒从宿主细胞中释放的方式不同。M13噬菌体在周质中组装，必须经细胞膜分泌;
而T7在细胞质中完成组装后直接从细胞裂解出来。因此，任何抑制分泌过程的蛋白和多肽都不能在M13系统中展示，或展示效果很差。例如，具有带电荷氨基酸残端的疏水蛋白、肽或多肽等，会因穿膜困难而无法展示。T7文库则不受这种序列限制，而且，一般来说T7展示系统表达蛋白或多肽的种类要比M13这样的丝状噬菌体更多。
T7比M13优越主要还是表现在易于操作、表达能力以及亲和淘洗富集等方面。T7虽然要求体外包装但生长极为迅速。T7噬斑形成仅需3小时，比M13系统节约整整1天。M13则在测序方面比T7更方便。
T7噬菌体极为稳定，能在各种严酷的条件下不被破坏，而其它噬菌体常在亲和淘洗的过程中失去活性。因此，在T7系统的结合/洗脱过程中，可选用的试剂种类较广泛，亲和淘洗后噬菌体仍然保持很高的感染活性。
※ Novagen的人cDNA预制文库是怎么制备的？
Novagen的预制T7Select cDNA文库均以T7Select10-3b制备，材料是经 Novagen的Straight
A抯 mRNA分离试剂盒两次纯化的mRNA。mRNA最长达8 kb以上，经反转录，用Novagen的OrientExpress
Random Primer cDNA Kit （带甲基化dCTP）克隆。原始库的重组子为>1 x107 pfu，文库的滴度最低为1
x 1010 pfu。所有文库仅经一次包装和扩增。
※ 亲和淘洗有什么好处？
亲和淘洗用于检测有蛋白或多肽参与的相互作用非常有效。如果目的序列的配合基被纯化和组装，即可用多肽或蛋白库与之反应(通常在柱子或96孔板上进行)，检测其结合情况。“捕获”的完整噬菌体经洗提、扩增，再经2至3次这样的富集，即可在很短的时间内一次完成药物或纯化的受体与为数众多的多肽或蛋白的结合分析。采用这种方法进行配合基(如信号转导中间体区域)结合区作图也是可行的。 |
