T7
Select OrientExpress 第一天 合成cDNA第一链和第二链
cDNA平端化以便克隆
与接头连接
第二天 消化接头
cDNA按片段大小分区
(如需要还要切割制备载体臂)
将cDNA与载体臂连接
第三天 体外包装噬菌体
铺板,3+小时后挑噬斑
扩增文库
合计: 约3天
下一步:用PCR或亲合筛查筛选文库
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T7Select
cDNA克隆的亲和掏洗:
第一天 亲和掏洗配体固定化(如用96孔ELISA板)
进行第一轮亲和掏洗(将噬菌体裂解物与配体
孵育,TBST洗,洗脱结合的噬菌体
扩增洗脱的噬菌体(经1-3小时培养)
进行第二轮亲和掏洗
扩增洗脱的噬菌体
第二天 根据需要进行第三轮亲和掏洗
噬菌体扩增
根据需要进行第四轮亲和掏洗
合计: 约2天
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