在先导化合物分子的二级筛选中，建立先导化合物与药靶分子之间的作用方式、检测方法是目前药物筛选工作中发展最快的方面。在二级筛选中需要有比一级筛选更强的生物相关功能分析的方法。这些方法更重要的是确定一种化合物对多个药靶的活性，而非开发一个特别检测方法的细胞株。为此我们引入腺病毒载体转导来探究多个关键细胞信号图径靶点.腺病毒载体提供将哺乳类基因转化获得高水平基因表达的系统。以下的结果是用腺病毒载体，采用EGFP再分布方法和报告基因方法获得的数据.这一方法可最高程度减少研究的实验时间，快速获得多靶点功能分析结果。

实验
　　载有EGFP融合蛋白或报告基因检测的腺病毒载体来源于二个质粒重建系统(Ng等2000)
　　实验在二天内完成
　　图像获得是用GE Healthcare 的 IN Cell analyzer1000系统及相应分析数据模块进行定量荧光分析。

结果
　　1）EGFP再分配方法

　　糖皮质素受体（GCCR）方法
　　EGFP-GCCR先是位于内质网膜上（图1a），当有糖皮质素结合到受体上后，会转位到核中（图1b）由IN Cell analyzer1000获取的图像由核运输分析软件模块进行数据分析（图1C）表1说明多种细胞株可用于表达EGFP-GCCR转位分析。

　　MAPKAP激酶2方法
　　P38 MAPK信号途径在炎症细胞因子和细胞应激时可被激活。MAPKAPK2是P38 MAPK的直接底物，并从核转到胞质。转位状况可表示上游P38 MAPK信号的关况。图2a说明Hela细胞被茴香霉素刺激后MAPKAPK2-EGFP的分布。当用P38 MAPK抑制剂SB203580作用后茴香霉刺激转位的作用被抑制（图2b）

图1.Hela 细胞转导的腺病毒载体表达EGFP-GCCR,图像为不加(a)和加入(b)200nm dexamethasone24小时后的图像.		图1C.EGFP-GCCR在加dexamthasone到Hela细胞后的核转位。

　　EGFP-FYVE方法（P13激酶）
　　FYVE功能区位于P13P上，受肝细胞生长因子一酪氨激酶调节，水平受P13激酶活性被蔓青霉素抑制后，EGFP-FYVE会从原来内质网膜 （3a）上扩展到整个胞质中（3b）。

　　EGFP-PLC б -FH功能方法
　　plc б 通过其PH功能区结合到质膜的脂质（P1P2）上，一个与PLC б GPH功能区融合的EGFP蛋白可用来测定P1P2的代谢状况

　　当用ATP刺激时，EGFP-PLC б-PH从质膜（4a）上转位到胞质中（4b）

表1.多种载有腺病毒载体的细胞株用于EGFP-GCCR表达转位的检测。

图2 编码有MARKAPK2-EGFP的腺病毒载体在Hela细胞中用300nm茴香霉素刺激（2a）及抵制剂SB203580作用后（2b）的图像。		图2c 载体腺病毒载体的Hela细胞在茴香霉素刺激下表达MAPKAPK2-EGFP融合蛋白

		图4 从IN Cell Analyzer1000上获取CHO的细胞表达EGFP-PLC б-pH功能区转位图像。休止细胞（a）和用50mmol ATP刺激

　　2) 报告基因方法
　　腺病毒载体表达的NTR报告基因方法可在 IN Cell Analyzer1000上进行分析。

图5 显示用刺激剂诱导NTR在U-2OS细胞中表达GEN-NTR报告基因

表2 说明多种细胞株进行腺病毒载体报告基因表达的结果。
图5 刺激剂诱导U-20S细胞腺病毒载体NTR报告基因表达
表2 NTR基因被诱导表达