文献参考

DNA 纯化：

　　在紫外灯下，从已电泳好的琼脂糖凝胶中切割出含3.49 kb DNA片段的凝胶，共18个样品。其中9个样品用本试剂盒纯化，另外9个用其他公司的试剂盒。所有样品均按每种试剂盒的操作说明用正确的方法洗脱。用洗脱缓冲液将洗脱液的终体积调节到30ml。然后所有的样品都用限制性内切酶酶切并作平行对照。

酶切反应：

　　纯化的PCR产物用10或20个单位的EcoRI　EcoRV　HindIII酶切。总反应体积为25ml，其中15ml为DNA样品，另外10ml为内切酶和缓冲液的混合物。先将除样品外的酶和缓冲液加到离心管中混匀，离心甩下内壁的溶液。待所有样品的这种混合液配好后，再一起加入样品，以保证每个样品酶切反应的起始时间相同。放入37。C孵育2小时后加入2.5ml 10×Gel Loading Buffer，停止反应。将每种样品加到150ml 1.3% OmniPur琼脂糖凝胶的上样孔中，在95V电压 1×TBE缓冲液体系条件下电泳3小时，放入50 ng/ml 的溴化乙锭溶液中染色20分钟后用去离子水洗脱30分钟。

结果

讨论

　　限制性内切酶充分地消化了用本试剂盒从凝胶中纯化的DNA，酶切效果与其他公司纯化产物相比，结果相同或者更好。特别是在EcoRI的酶切反应里，用本试剂盒纯化的DNA酶切效果明显优于其他公司的试剂盒。

参考

1PCR反应扩增核苷酸美国专利号4683105和4683202，罗氏生物公司持有并许可使用。
作者：George Halley,Eppendorf-5,Prime, Inc.