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  泳道1:低分子量标准
泳道2:样品
泳道3:穿透峰
泳道4:经过4-步后的产物

图2.(A)GFP-His6,28kDa蛋白质的三步纯化(AC-DS-IEX)。(B)MBP-His643 .7 kDa蛋白质的四步纯化(AC-DS-IEX-GF)。(C)图(B)中显示的四步纯化结果的考马斯染色的SDS-PAGE凝胶。

ÄKTAxpress 是一耐用的高重复性系统,对温度敏感的样品可以在冷室或冷箱中操作。作为完整的高通量解决方案的一部分,可以使用的预装柱的介质含有HisTrap HP和GSTrap HP。预装柱消除了耗时的装柱并有助于确保结果的重复。(见下表)表1显示当系统在所有单元上运行同一流程时可以纯化的样品数目和所需的运行时间。

 

 

表1. 在室温下的运行时间(未计算上样时间)和可以处理的样品数目。

流 程
典型的运行时间(小时)
最大的样品数目
AC-DS
4.5
16
AC-GF
10.5
16
AC-DS-IEX
6
12
AC-DS-IEX-DS
8.5
12
AC-DS-IEX-GF
8
8
DS
0.75
16
GF
6
16

流 路
根据所选择的流程,每个单元可以进行多达四个样品的连续纯化。在一个系统中四个单元的每一个以平行方式动作。

样品经进口阀并通过气泡感应器装入(见图3)。系统泵经气泡感应器将样品送到亲和柱,在洗涤步骤中融合蛋白质仍保留在该柱上,这时流经的样品由紫外检测器进行检测,并收集在另外的小型容器中(每一样品一个容器)。每一样品加到各自的亲和柱中。当所有样品加完后开始洗脱和进一步纯化。

图3.一个单元运行两种样品的四步流程的流程图。Superloop 用于储存标记酶切的蛋白酶溶液

 
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