图5. 由海肾萤光素酶及红色Chroma-Luc™萤光素酶产生的光谱及萤光的测定。
A. 测定用pCBR-对照质粒（Cat.# E1421）稳定转染的CHO细胞裂解物中纯化的海肾萤光素酶及红色Chroma-Luc™萤光素酶的光谱。用设定了收集发射光的扫描分光光度计捕获光谱。阴影区域代表所使用的两个滤光片：一个为510/60nm滤光片, 一个为610nm以上滤光片的最大重叠区域。B.监测HEK 293细胞中6小时内的海肾萤光素酶及红色Chroma-Luc™萤光素酶。用两个载体对96孔板中的细胞进行瞬时转染。两个载体包括：i)在CRE启动子调控下的

  

带有PEST及CL1去稳定序列的海肾萤光素酶基因，及ii)含有受SV40启动子控制的Chroma-Luc™萤光素酶的pCBR-对照载体（Cat.# E1421）。转染后大约24小时，将细胞暴露于60μM EnduRen™底物及2mM甲壳虫萤光素。2小时后，用1μM异丙醇及100μM RO-20-1742(Calbiochem, La Jolla, CA)处理细胞。在6小时内用Turner BioSystems Veritas™微孔板萤光发光计（Cat.# E6501）测定萤光。对于每一次测定，使用蓝色滤光片（510/60）测定海肾萤光，用红色滤光片（610以上）测定Chroma-Luc萤光。计算每种发光的总信号（使用www.promega.com/techserv/tool/的spredsheet 工具，选择“Chroma-Luc Calculate”）然后用经过诱导的发光平均值除以未经过诱导的发光（经红色化学发光校正或未经校正）平均值计算诱导率。对于每一个数据点，n=12并标出标准差。

结 论
　　海肾萤光素酶报告基因系统只需要氧及腔肠萤光素底物以产生发光信号。对于原位海肾萤光素酶报告基因系统，提供腔肠萤光素成为活细胞中产生发光的全部所需。但是由于以前使用的腔肠萤光素在水相培养基中的不稳定性，因而限制了这一方法的灵敏度及用途。化学保护的ViviRen™及EnduRen™活细胞底物克服了稳定性问题，使得以实时，方便的方式稳定、灵敏地检测海肾发光成为可能。

参考文献
1. Sherrill, C.B. et al.(2004) J. Am. Chem. Soc.126, 4550–6.
2. Johnson, S.C. et al.(2004) Nucl. Acids Res.32, 1937–41.
3. Moser, M.J. and Prudent, J.R. (2003) Nucl. Acids Res. 31, 5048–53.
 
使用均相的发光方法检测DPPIV活性

MARTHA O’BRIEN, PH.D.1, BILL DAILY, PH.D.2, MIKE SCHURRIA, B.S.2, AND TERRY RISS, PH.D.11PROMEGA CORPORATION, 2PROMEGA BIOSCIENCES
 

　　DPPIV是一种丝氨酸蛋白水解酶，参与免疫调节、信号转导及细胞凋亡等许多生物过程。DPPIV-Glo™ 蛋白水解酶检测系统是一种用于DPPIV活性测定的均相的发光检测系统。

　　在检测中，只需要加入DPPIV-Glo™ 试剂， DPPIV 切割所提供的底物，产生与DPPIV 活性成正比的“辉光”型发光信号。 这一检测系统可以很方便地用之于高通量筛选。
     

简 介
　　二肽酰肽酶IV (DPPIV)是一种丝氨酸蛋白水解酶，可以在多肽的倒数第二个L-脯氨酸或 L-丙氨酸处，切除N-末端的二肽(1)。DPPIV 是一种表达于多种细胞表面的多功能蛋白，这些细胞包括上皮细胞、内皮细胞及淋巴细胞。它与T细胞激活抗原 CD26及腺苷脱氨酶结合蛋白相同(2), 同时它也做为可溶性蛋白被释放到细胞质中(3)。CD26/DPPIV的底物包括一大类含有脯氨酸的肽，如生长

  

因子、趋化因子、神经肽及血管活性肽。DPPIV参与免疫调节、信号转导及细胞凋亡，并在肿瘤的发展过程中发挥重要作用(4)。更为重要的是，DPPIV是II型糖尿病的一个治疗靶标，因为它具有血清蛋白酶的功能，可以切割糖代谢相关激素，进而调节血糖稳态 (3,5,6)。研究表明 DPPIV 抑制剂可以改善糖耐量异常(1,7)。