图2. 在无自发光的情况下,发光的原位测定的灵敏度被显著提高。测定稳定表达海肾萤光素酶的CHO细胞中的发光,同时测定未转染的CHO细胞中的自发光。将腔肠萤光素(图A)或ViviRen™底物(图B)加入到培养于含有12% FBS的F12培养基中的CHO细胞。加入腔肠萤光素或ViviRen™底物2分钟后用Turner BioSystem Veritas™发光光度计测定萤光或自发萤光(n=6)。利用图A及图B中的数据计算得到信号对背景的比值[(萤光-自发萤光)/自发萤光],并标于图C。
图3. ViviRen™底物产生的最大发光强度比EnduRen™底物的高约20倍,但是加入底物大约45分钟后,它们的强度趋于一致。稳定表达海肾萤光素酶的CHO细胞与60μM的ViviRen™或EnduRen™底物共同孵育,在1小时内,每隔2分钟用Turner BioSystem Veritas™发光光度计测定萤光(n=6)。大约45分钟后,两个样品的发光趋于一致。
图4. EnduRen™底物能够用于重复测定活细胞内的海肾萤光素,在长时间内监测相同细胞群中的RNAi效应。可以通过测量活细胞中发光信号的下降来监测siRNA对稳定表达海肾萤光素酶的CHO细胞中该酶表达水平的抑制效应。用针对非特异阴性对照序列或针对海肾萤光素酶靶序列的5nM或5nM siRNA转染细胞。按照所示时间点测定海肾萤光素酶的活性。数据用转染了特异靶序列的细胞中的海肾萤光素酶的活性与非特异对照的百分比进行校正。结果为12个孔的平均值。