图2. 产物积累过程中 dabcyl 对荧光信号的淬灭。

图3. 扩增及标准曲线。 A. 典型的扩增曲线，显示反应中每一循环的相对荧光单位(RFU)。扩增临界值用一条横穿图表的水平直线表示。该临界值用于建立临界循环数(Ct),对每一个样品而言，该值为扩增曲线穿越临界值的循环数。B. 用图A中的扩增曲线数据得到的该样品的标准曲线。蓝色圆圈代表标准品，红色方块代表未知浓度样品。数据由 BioRad iCycler® 仪器收集，用Plexor™ 分析软件进行分析。

Plexor™ 技术的应用
　　 基于Plexor™ 技术的扩增反应动态范围宽，灵敏度高，进行多产物反应时不丧失灵敏度，这些特点适用于多种实时PCR反应。偶连的（一步法）及非偶连的（两步

法）RT-PCR可以用于研究基因表达，还可以对病毒或其它RNA进行定性或定量。Plexor™ 试剂还可以用于对基因组DNA、线粒体DNA、cDNA或病毒DNA样品中特定DNA序列进行定性或定量。最后，还可用于单核苷酸多态性（SNP）检测，来鉴别已知DNA序列中特异位点的碱基变化。

图4. 热融解曲线。这些融解曲线是由图3所示的实验数据得来。该曲线是用荧光强度相对于温度的变化率对温度作图，在荧光强度变化最大时计算温度。按照图3描述的方法收集并分析数据。

多产物反应
　　两个重要特点增强了Plexor™试剂的功能：进行多产物反应的能力及与多种实时仪器平台的兼容性。在多产物反应中，对于每一标靶的一条引物必须使用不同的荧光标记物。荧光标记物的类型与数量取决于所使用的实时仪器的检测能力。

数据分析及仪器的兼容性
　　Plexor™分析软件将让用户“看到”使用不同仪器得到的扩增数据，制作标准曲线，计算未知样品的DNA 浓度。该分析软件可以免费提供给用户，并可以让用户把数据从他们所希望使用的仪器中导出。与本软件兼容的仪器有 ABI PRISM® 7000及7700序列检测系统、Applied Biosystems 7300, 7500及7900HT实时PCR系统, Roche LightCycler® 1.0及2.0仪器，Bio-Rad iCycler® 热循环仪、 MJ Research DNA Engine Opticon® 2荧光检测系统、Cepheid SmartCycler® 系统和Stratagene实时PCR 系统。

参考文献
1. Sherrill, C.B. et al.(2004) J. Am. Chem. Soc.126, 4550–6.
2. Johnson, S.C. et al.(2004) Nucl. Acids Res.32, 1937–41.
3. Moser, M.J. and Prudent, J.R. (2003) Nucl. Acids Res. 31, 5048–53.