载体间容易转移
　　pGL4 载体的另一个特征是重新设计了多克隆区，使得启动子以及其它转录元件在pGL4 载体系列之间，或从pGL3到pGL4载体间易于转移(图5)。新的多克隆区保留了大部分pGL3载体的主要限制性内切酶的位点,但在新的多克隆区的两端引入了两个Sfi I位点(Sfi I可以识别DNA序列GGCCNNNNNGGCC，N可以是A，T，G或C)。每个位点产生独特的粘末端。这一性质允许元件（没有内部Sfi I位点）的定向转移：经过简单的Sfi I消化，从一个pGL4载体的多克隆区转移到另一个载体。

结论
　　pGL4载体系列代表了新一代萤光素酶报告基因载体，有多种基因和启动子配置供用户选择。与它的前一代产品pGL3载体相比，pGL4载体减少了异常表达的风险,能够实现较好的萤光素酶表达，提高了信噪比。这些特点，加之它很容易在载体之间转移，使得pGL4成为萤光素酶报告基因载体最好的选择。

图4. 萤火虫luc2 基因显示比luc+具有更高的表达。luc2 基因被克隆到 pGL3-control载体内(Cat.# E1741),替换了luc+基因。这样，两种萤火虫萤光素酶基因就在相同的pGL3-control载体的骨架上。包含其中任一种萤火虫萤光素酶基因的两个载体被转染到NIH/3T3，CHO，HEK 293和HeLa细胞内，使用 phRL-TK载体（Cat.# E6241）作为转染对照。转染24小时后，使用Passive Lysis Buffer（Cat.# E1941），对转染后的细胞进行裂解，使用双萤光素酶检测系统（Cat.# E1910）测定发光强度。相对发光强度为经过与phRL-TK载体对照转染细胞的海肾（Renilla）萤光素酶表达的标准化处理。柱状图上给出了（luc2和luc+）表达值之间的倍数关系。

编者备注: Promega 正在研制其它pGL4载体，以满足研究人员在报告基因方面的需求，包括含有可选标记的载体。 请继续关注Promega在2005年关于pGL4报告基因载体方面发布的新消息。

技术手册：
pGL4 Luciferase Reporter Vectors Technical Manual #TM259.
www.promega.com/tbs/tm259/tm259.html
 

图5. pGL4 载体的多克隆区。 图中，Bgl I和EcoR V位点在hRluc基因中也存在，因而不应该用于基于hRluc－海肾(Renilla)的pGL4载体的克隆。

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pGL4.10[luc2] Vector
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pGL4.70[hRluc] Vector
20µg
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pGL4.71[hRlucP] Vector
20µg
E6891
pGL4.72[hRlucCP] Vector
20µg
E6901
pGL4.73[hRluc/SV40] Vector
20µg
E6911
pGL4.74[hRluc/TK] Vector
20µg
E6921
pGL4.75[hRluc/CMV] Vector
20µg
E6931

参考文献
1. Wood, K.V. (1995) Curr. Biol. 6, 50-8
2. Naylor, L.H. (1999) Biochem. Pharmacol. 58, 749-57
3. Wood, K.V. (2004) Progress in Biomedical Optics and
　 Imaging, Nicolau, D.V. and Raghavachari,R.,eds. SPIE-The
　 International Society for Optical Engineering,Bellingham,
　 66-67.
4. Zhang, Y. et al. (2001) Promega Notes 79, 6-11.
5. Almond, B. et al. (2003) Promega Notes 85, 11-4.
6. Annicott, J.S. et al. (2001) Bio Techniques 31, 993-4
7. Ho, C.K.M. and Nordeen, S.K. (1999) BMC Biotechnology 4, 10
8. Grimm, S.L. and Strauss, J.F. (2004) Bio Techniques 27,
　 220-2
9. Almond,B. et al. (2004) Promega Notes 87, 18-22
10. Bert, A.G. et.al. (2000) Plasmid 44, 173-82
11. Thirunavukkarasu, K. et al. (2000) Bio Techniques 28,
　 506-10