交叉流动膜微滤已经确定成为用于细胞收获、细胞洗涤和裂解液澄清的生物工艺方法。由于具有开放的管道,许多研究人员认为中空纤维膜是用于收获哺乳动物细胞和处理发酵细胞培养液的现代方法。因为MF
微滤膜一般比超滤(UF) 膜有较高的初始通透速率,所以MF中空纤维膜分离柱常被认为是更好的选择。但是,MF膜的开放的孔为进料中的亚微米大小的细胞碎片提供了接触位置,常更早地造成孔径阻塞,从而造成生产率的下降。
解决办法:Amersham
Bioscience 中空纤维超滤柱
由于含大量的脂多糖,大肠杆菌的这种细胞碎片(主要造成膜淤积的“粘性”成分),尽管这不是直观的,但是某些研究人员已经发现,通过改用小孔的Amersham
Biosciences500,000 NMWC 中空纤维UF 膜可以得到改进。
尽管对于流动总效率来说,膜孔开放越多,初始通量越高,但是客户应该选择最浓密的膜,使所要求的分子或最大的污染物可以顺利通过。
在长时间的操作中,越浓密越好
和MF柱相比,较浓密的500,000 NMWC“包皮的”UF 膜
使保持的细胞材料保持在本体液流中(在这里不会阻塞孔径,并在运行过程改进了流动稳定性)。图1 表示这种关系的图解。
大肠杆菌的实例
最近,一位大肠杆菌细胞的研究人员利用了Amersham
Biosciences 500,000 NMWC中空纤维UF膜分离和浓缩发酵培养液,然后用含10%
甘油的存储缓冲液交换。
图1. 各种膜孔径的流动曲线。最大的孔径A初始的通量最大,但很快被液流中的颗粒堵塞。中等大小的孔径B随着时间提供相当多的滤液。最小的孔径C,尽管其初始通量的只是A的一小部分,但是其随着时间会得到最多的产物。
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该工业的“要点”如下:
生长培养基: 缓冲的植物油蛋白质水解产物,
初始细胞密度:大约60g 湿细胞重量/升(OD 30)初始体积: 16-18 升
型号: UFP 500-C-CA (可高压灭菌的)
NMWC: 500,000
纤维管内径: 0.5 mm (20 mil)
膜面积: 0.48 m2
(5.2 ft2)
通道长度: 63.5 cm
循环速率: 6 lpm (-11.000 sec-1
切变速率)
生产率(avg): 大约35 LMH
由于相当低的细胞密度,这位研究人员选择了我们的0.5
mm纤维管内径的膜。一般来说,腔直径膜的最好选择是1 mm。如果管的内径可以无阻碍地通过细胞材料,则可以提供通过最大化的膜面积和最小化泵的循环速率以达到最适宜的交叉流动速度而提供“双赢”形势,而且,我们的超滤柱的高压灭菌的独特能力可以使这位研究人员保持完全无菌的过程。
后续的试验证实了该问题
为评价这种膜的流动性能的一致性,进行了后续的四种试验。在进行每次试验后,用0.5 N 的NaOH 在50℃清洗30分钟。在进行每次后续试验之前,将膜和管进行高压灭菌。具有淤积进料流的中空纤维膜的“清洗和重新使用”特征。
图2 为清楚地显示出一致的流动性能。这种数据还指出了
Amersham Biosciences
膜柱可以按比例放大
将这些结果外插到我们的具有相同通道长度的4 英寸直径可在线灭菌的65MSM柱,人们能在相同时间间隔内对200升的样品进行相似的浓缩和洗滤。
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