限实验室使用

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TNT® 裂解物中海肾萤光素酶的表达
　　我们使用TNT® T7快速转录/翻译耦联系统(基于兔网织红细胞裂解物, Cat.# L1170)对Flexi® 载体克隆体外表达合成的海肾萤光素酶的效率进行了检测。在25μl TNT® 反应体系中加入质粒DNA(500ng)，并于30℃孵育90分钟。反应系统中包括了两个阳性对照pRL-SV40 (Cat.# E2231)及phRL-nul(Cat.# E6231)。合成的蛋白用FluoroTect™ GreenLys in vitro Translation System(Cat.# L5001)进行标记。将2.5μl TNT®反应产物加入到100μl海肾萤光素酶检测试剂中，用Orion微孔板发光检测仪(Berthold Detection Systems)测定发光值。蛋白用SDS-PAGE进行分离。合成的海肾萤光素酶及海肾萤光素酶－GST融合蛋白与预期的大小一致（数据未列出）。这些结果，再一次验证了Flexi®载体中的T7 RNA 聚合酶启动子在TNT®系统中表达蛋白的功能。不同载体的表达水平并不相同；原因可能在于融合蛋白的产生(例如，pFN2K-hRL)或者由于蛋白编码区5’和3’的序列不同造成的。

结论
　　 我们开发了一种新的、以两种稀有内切酶－Sgf l 和Pme I为基础的蛋白编码区的定向克隆系统。Flexi® 载体系统能够将蛋白编码区在不同载体间进行转移，反应快速、高效、保真度高。

参考文献
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