普洛麦格中文通讯 2002年第五期
用Wizard® SV 凝胶及 PCR 纯化系统纯化 DNA
Wizard® SV 凝胶及 PCR 纯化系统
  Promaega公司:Natalie Betz,Ph,D和Tom Strade,B.S.
摘要

Wizard® SV 凝胶及PCR纯化系统采用SV小柱快速纯化琼脂糖凝胶块中的DNA片段或直接纯化扩增 反应产物。纯化的DNA可用于荧光测序、克隆、标记、扩增、限制性酶切及体外转录翻译等。

Wizard® SV 凝胶及PCR纯化系统用于纯化标准或低熔点琼脂糖凝胶中回收的DNA片段及直接纯化扩增反应的PCR产物。

 

引言

  纯化DNA片段是分子生物学的一种常用技术,纯化的DNA片段下游应用包括PCR、克隆、测序、限制性酶切及其它一些酶反应。DNA常采用电洗脱方法从 琼脂糖凝胶条中回收纯化,这种方法费时,并且得到的DNA浓度很低,需用乙醇沉淀方法进行浓缩。

Wizard® SV 凝胶及PCR纯化系统用于从标准或低熔点琼脂糖凝胶纯化长度100bp-10kb的DNA片段,缓冲系统采用TBE或TAE溶液,回收效率为70-95%。浓度高达3%的琼脂糖凝胶可成功地应用该系统进行 纯化,并且采用不同厂家的琼脂糖在操作上没有差异。另外采用低熔点和高熔点琼脂糖应用本系统纯化的 DNA在下游应用功能上也没有差异。 

  Wizard® SV凝胶及PCR纯化系统除了可用于凝胶回收纯化DNA外,也可直接纯化长度为100bp-10kb 的PCR产物,回收效率为80-95%。去除PCR反应中未掺入的核苷酸、引物及缓冲液对很多下游应用是必 需的或有益的。 

  该系统以膜为基础,可结合高达40μg DNA,DNA纯化所需时间依赖于样品数量,最少可在15分钟内完 成。纯化的DNA不需进行任何处理,可直接用于下游应用,包括自动荧光DNA测序、克隆、酶切或体外转 录及翻译。 Wizard® SV凝胶及PCR纯化系统的基础是在离液序列高的(chaotropic)盐存在时,DNA能够结合到硅膜上。对于凝胶纯化,需要将电泳后切下的DNA目的条带溶解到含

有异硫氰酸胍的膜结合缓冲液中;而PCR产物纯化只需将膜结合缓冲液直接加到扩增反应

图1. Wizard® SV凝胶及PCR纯化系统凝胶纯化或PCR产物直 接纯化DNA片段流程图

产物中。然后通过离心或真空使溶液穿过薄膜的同时, DNA结合到硅膜表面,从而分离DNA。用膜洗涤溶液清洗膜上结合的DNA后,最后用水将DNA洗脱下来。该系统可用于线性DNA片段、PCR产物、超螺旋质粒DNA、线性的或环状的单链DNA的纯化。但单链 DNA的纯化产率可能会低于双链DNA的纯化产率。

产品特点:

   Wizard® SV凝胶及PCR纯化系统操作简便,图1为操作流程图。根据处理样品的数量和类型,操作过程大概需要15分钟,并且只需一台小型离心机。

Wizard® SV凝胶及PCR纯化系统可有效地纯化0.1-10kb的DNA片段(表1和图2)。回收率是通过纯

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