Promega中文通讯第9期

摘要
自从1982年普洛麦格公司介绍了RNasin^®核糖核酸酶抑制剂以来，已有6,000多篇文章将RNasin^®核糖核酸酶抑制剂作为RNA的保护剂而引用，使其成为最可信赖的RNA保护试剂。RNasin^® 核糖核酸酶抑制剂通过与核糖核酸酶紧密结合，而阻止在实验室操作过程中核糖核酸酶对脆弱的RNA进行降解。核糖核酸酶抑制剂在多种实验条件及环境下，均可发挥作用（1,2）。可信赖的核糖核酸酶抑制剂需要满足3个主要标准。本文阐述了这些标准并揭示RNasin^®核糖核酸酶抑制剂完全符合这些要求，保证核糖核酸酶不会干扰你的RNA分析工作。

纯化方法和质量控制保证一个干净的产品来保护您的RNA

标准1：核糖核酸酶抑制剂应保护RNA而不应引入核糖核酸酶
核糖核酸酶抑制剂必须没有核糖核酸酶。核糖核酸酶抑制剂与核糖核酸酶按1：1的比例结合成紧密的复合体，导致核糖核酸酶抑制剂与核糖核酸酶之间的极强的相互作用。因此，在纯化过程中核糖核酸酶抑制剂与核糖核酸酶复合体的残留明显成为一种担心。图1表明某些商业制备的胎盘核糖核酸酶抑制剂存在这种残留。普洛麦格公司开发了将结合于核糖核酸酶上的核糖核酸酶抑制剂与游离的抑制剂分离的有效方法。而且，普洛麦格公司设计了专门用于对纯化的抑制剂中的核糖核酸酶残留进行评估的质量控制实验。质量控制实验包括将核糖核酸酶抑制剂加热到超过它的变性温度，在此温度下，核糖核酸酶抑制剂：核糖核酸酶复合体将解离，并检测此时的核糖核酸酶活性。纯化方法及质量控制实验保证用干净的产品保护你的RNA。

标准2：核糖核酸酶抑制剂应当与普遍应用相兼容
核糖核酸酶抑制剂必须在通常的RNA分析的化学环境中发挥作用。另外，它们不应干扰通常进行的分子生物学反应。对于多种RNA分析步骤的兼容性，普洛麦格

图1.重组的RNasin^®核糖核酸酶抑制剂与猪核糖核酸酶抑制剂的核糖核酸酶及潜在的核糖核酸酶活性的比较。使用不同量（100单位或 200单位）的每种核糖核酸酶抑制剂与0.1mg/ml RNA（1.2 kb Kanamycin 阳性对照 RNA; 产品目录号: C1381）在37 ℃温育60分钟。加入RNA前，某些样品67 ℃ 预热15分钟（变性核糖核酸酶抑制剂并释放潜在的核糖核酸酶）。反应产物用1.5%琼脂糖凝胶电泳进行溴乙啶染色分析。泳道1和2，各为100和200单位重组的RNasin® 核糖核酸酶抑制剂；泳道3和4，各为100和200单位的猪核糖核酸酶抑制剂；泳道7和8，各为100和200单位67℃ 预热的RNasin®核糖核酸酶抑制剂；泳道9和10，各为100和200单位67℃ 预热的的猪核糖核酸酶抑制剂；泳道5，未加糖核酸酶抑制剂；泳道6，在未加核糖核酸酶抑制剂的条件下，RNA与核糖核酸酶A共温育。详细内容可参阅参考文献3。

公司的RNasin^®核糖核酸酶抑制剂已经过严格的检验。与各种酶及系统的兼容性使其成为所有以RNA为基础的使用的理想抑制剂，包括微阵列及定量，实时 RT-PCR。
　　反转录对于大多数RNA分析都非常关键。反转录反应通常在适于M-MLV RT的37oc 或适于AMV RT的42℃ 以上进行。点突变产生的无RNase H活性的M-MLV，Improm-II^TM及AMV 反转录酶均可在 50 ℃及以上使用。这些温度值一度被认为超出了RNasin^® 核糖核酸酶抑制剂的温度范围。但是，最近的研究表明，即使在 70℃以上温育，在使用RNasin^® 核糖核酸酶抑制剂的反应中，也没有观察到核糖核酸酶活性（图2）。

标准3：核糖核酸酶抑制剂必须快速起效
　　所有的公司及研究人员都试图制造无核糖核酸酶的环境，设计消除核糖核酸酶的RNA纯化方法。但是，