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2003年第4期

新产品介绍

长效抑制基因表达:GeneEraserTM shRNA表达载体



长期基因抑制

● 有效的基因抑制
● 瞬时和长期的基因沉默研究
● 转染细胞的富集

  近年来的研究发现,一些小的双链RNA可以通过促使mRNA降解,高效、特异的阻断体内特定基因表达。称为RNA干扰(RNA interference,RNAi)。由于RNAi可以作为一种简单有效的代替基因敲除的工具,在功能基因组学研究、基因治疗等领域得到了越来越多的重视。为此被Science评为2001年最重要成果之一。RNAi,即引入双链RNA,通过特异性结合互补链从而抑制基因表达/引发转录后沉默。许多的研究人员开始用RNAi作为一种工具研究基因功能。较早的哺乳动物RNAi实验中,siRNAs通过化学方法合成。进一步的,开始有了商业化的体外转录方法合成siRNA的试剂盒提供,比化学合成方法经济。现在已有研究小组开发表达载体,能够在哺乳动物细胞中持续表达siRNAs。Stratagene的新产品GeneEraser shRNA expression vector,可以表达shRNA,在体内加工后形成类似siRNAs的分子,能够引发RNAi过程。


  小干扰RNA分子(siRNA)已迅速成为一个通过抑制目的基因的表达来研究哺乳动物基因产物功能的强大的工具。通常这些短的,双链RNA分子(shRNA)是由体外产生且价格昂贵。采用Pol III启动子在体内表达短发夹RNA(shRNA)是有效的降低基因表达一个更为经济的方法。Strtagene开发了GeneEraser shRNA表达系统优化了shRNA的表达及基因的抑制。体外合成siRNA的方法尽管非常有效,但其抑制的持久性通常仅有5-7天,使之不能用来进行长期的基因抑制。而用体内表达短发夹RNA的方法,使不能持久抑制基因表达的问题迎刃而解。


shRNA 是怎样工作的?

  产生dsRNA分子的另一个有效的方法是在体内表达一个短发夹RNA分子(shRNA)。这种shRNA包含两个由一个小环序列所分离的短反向重复序列,是由Pol III启动子控制的。其中一个反向重复序列与目的基因互补。ShRNA随后被加工成siRNA,降解目的基因mRNA、抑制表达。

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