逆转录病毒
逆转录病毒能整合到分裂细胞的基因组中生产稳定的转化株。MMLV逆转录病毒载体是最常用的用于生产侵染/转导小鼠和人细胞的重组逆转录病毒的载体。研究者可以选择不同的感染复数(MOI)以期严格控制基因拷贝数或是使转导效率达到>90%以上。Stratagene的ViraPort逆转录病毒基因表达系统包括pFB和pFB-Neo表达载体。这些载体带有MMLV
5’和3’LTRs多克隆位点两侧序列以及一个扩展的包装信号。系统还包括pVPack-GP和4个pVPack-Env包装载体,分别提供转录、包装和将病毒导向各种细胞的蛋白。Stratagene提供各种ViraPort逆转录病毒文库和转导即用型逆转录病毒文库上清液以及对照逆转录病毒,上清液表达荧光素酶,β-半乳糖苷酶,hrGFP(人源化绿色荧光蛋白)报告基因。
病毒基因转移系统常见问题
AAV-2即腺相关病毒-2,那么AAV-2与腺病毒到底有什么联系呢?
AAV-2是研究者在分离腺病毒是被首次鉴定。AAV-2的复制通常要求有腺病毒存在。AAV系统通过一个带有腺病毒基因提供腺相关病毒复制的必需基因,从而避免了使用活的腺病毒。AAV-2较小,为天然复制缺隐型ssDNA病毒,是细小病毒家族中的一员。腺病毒较大(36
kb),为双链线性病毒,可以感染多种哺乳动物或鸟类细胞及宿主。
哪些系统可以用来制备稳定细胞系?
无辅毒AAV系统能将目的基因整合到分裂/非分裂细胞,由于所有的病毒基因均已删除,免疫反应发生的可能性也因此降低到最小。免疫反应小进一步使细胞能高水平表达蛋白,时间长达18个月。ViraPort逆转录病毒系统也用于分裂细胞制备稳定细胞系;该系统的另一个优势是如果需要严禁控制蛋白表达水平,该系统可以调节基因拷贝数来方便地达到目的。相反,增加MOI可以是转导效率提高,达到90%以上。
采用那个系统可以高水平表达蛋白?
AdEasy腺病毒系统可以提供高水平蛋白表达以及正确的翻译后修饰。腺病毒并不整合到宿主基因组上,不会产生移码突变;当然,这个系统不能制备稳定细胞系。
Stratagene的AdEasy腺病毒系统比其它公司的产品有什么优势呢?
Stratagene的最初推出的AdEasy腺病毒系统大幅度减少了传统方法准备病毒的时间——从需要2个多月减少到2周。而新的AdEasy
XL腺病毒载体系统不仅具有采用大肠杆菌(而非哺乳动物细胞)制备穿梭载体和腺病毒载体骨架的优点,而且通过将克隆质粒转入BJ5183大肠杆菌细胞,从而将减少了生产和纯化重组质粒所需的时间和精力。
如果我能用常规转染方法将基因转入细胞,为什么还要用病毒转基因了?
用AAV和ViraPort制备稳定细胞系只需要7至8天,而其它方法通常需要至少1个多月。
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