EcoProTM系统
EcoProTM系统是改进型体外偶联转录/翻译体系。使用环状或线性DNA模板,高度优化的EcoPro和EcoPro
T7抽提物可从大肠杆菌和T7启动子有效合成下游基因的全长蛋白。EcoPro抽提物经专利方法制备,表达水平高,且主要为全长蛋白,而常见于其它原核体外表达系统的二级产物显著减少。
有两种形式的EcoPro系统可供选择。在标准EcoPro中,大肠杆菌RNA聚合酶从大肠杆菌启动子驱动下游基因的表达。在EcoPro
T7系统中,抽提物添加了T7 RNA聚合酶,因此除了大肠杆菌启动子,蛋白合成还受T7启动子控制。在两种EcoPro系统中,ATG起始密码子6-11碱基对上游带有强的原核核糖体结合位点(RBS,如AAGGAG)的模板能够获得最优化的翻译。EcoPro抽提物含有最高水平模板依赖转录和翻译所必需的所有成分,可节省反应配制时间和费用。EcoPro系统可与多种非同位素检测方法(包括FRETWorksTMS.TagTM分析)兼容。
应用
√ 快速确认DNA结构中的开放读码框架
√ 突变功能测试
√ 筛选新抗生素
√ 体外进化技术如多聚核糖体展示
√ 分子诊断程序如蛋白删截试验
√ 表达毒性基因
√ 高通量表达克隆的基因
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