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2003年第3期
 
 
体外转录和翻译产品
 
 

用途
DNA编码区的功能分析、蛋白-蛋白相互作用和重组体快速验证

概述
EcoProTM系统和单管蛋白系统3(STP3TM)体外转录/翻译试剂盒,能够快速方便地表达分析所克隆的基因。EcoPro系统采用Novagen拥有专利的大肠杆菌抽提物,进行偶联的转录和翻译(一步法),适合线状和环状模板。用户可以选择大肠杆菌或T7启动子的体外表达试剂盒。
单管蛋白系统3采用Novagen专 有的两步等温法,经15分钟转录操作,转录产物在优化的兔网织细胞裂解物中被直接翻译。

 

 

EcoProTM系统

EcoProTM系统是改进型体外偶联转录/翻译体系。使用环状或线性DNA模板,高度优化的EcoPro和EcoPro T7抽提物可从大肠杆菌和T7启动子有效合成下游基因的全长蛋白。EcoPro抽提物经专利方法制备,表达水平高,且主要为全长蛋白,而常见于其它原核体外表达系统的二级产物显著减少。
有两种形式的EcoPro系统可供选择。在标准EcoPro中,大肠杆菌RNA聚合酶从大肠杆菌启动子驱动下游基因的表达。在EcoPro T7系统中,抽提物添加了T7 RNA聚合酶,因此除了大肠杆菌启动子,蛋白合成还受T7启动子控制。在两种EcoPro系统中,ATG起始密码子6-11碱基对上游带有强的原核核糖体结合位点(RBS,如AAGGAG)的模板能够获得最优化的翻译。EcoPro抽提物含有最高水平模板依赖转录和翻译所必需的所有成分,可节省反应配制时间和费用。EcoPro系统可与多种非同位素检测方法(包括FRETWorksTMS.TagTM分析)兼容。
应用

√ 快速确认DNA结构中的开放读码框架
√ 突变功能测试
√ 筛选新抗生素
√ 体外进化技术如多聚核糖体展示
√ 分子诊断程序如蛋白删截试验
√ 表达毒性基因
√ 高通量表达克隆的基因