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2003年第5期

· 哪些E. coli菌株可以配合QuikChange®系列试剂盒使用?
几乎所有的分子生物学日常操作时采用的E. coli均可以用于与QuikChange®配套。下列菌株带有 DpnI酶切必需的 dam 甲基化,可以明显降低背景。
XL1-Blue    BL21 AG1 BL21 Star™
XL1-Blue MRF’   BL21 (DE3)  TG1 Cells BL21-AI™
XL1-Blue MR    BL21 (DE3) pLysS ElectroTenBlue™ GeneHogs™
XL2 Blue   BL21 Gold DH12S  HB101
XL2 Blue MRF’     BL21 Gold(DE3) DH10B DP50
XL10 Gold    BL21 Gold (DE3)  pLysS DH5 α  NM514
XL10 Gold Kan    ElectroTenBlue™ JM101 C600
SURE    TKB1 NM522 AD494
SURE2    TKX1 SCS1 HMS174
ABLE C and K strains    TOPP JM109 BLR

· 常用型 QuikChange ®试剂盒可删除的最大片段是多少? 
从2.9 kb和5.7 kb的重组子上删除12 bp效率均达100%。 
有用户报告从5.6 kb质粒上删除84 bp片段获得58%的效率。 

· 常用型 QuikChange®试剂盒可插入的最大片段是多少? 
从2.9 kb的重组子上插入12 bp效率均达95%。 
有用户报告在8 kb 质粒上插入18bp片段获得80%的效率。 

· QuikChange® XL试剂盒最大可用多大的质粒? 
经 Stratagene公司检测,QuikChange® XL试剂盒可用11 kb的质粒。
某用户成功地进行了19 kb质粒上的点突变。

· QuikChange®多点突变试剂盒与QuikChange®、QuikChange® XL有什么区别?

QuikChange® Multi是目前唯一已经商品化的能在一个质粒上同时引入5个不同位点突变的试剂盒。 与其它QuikChange®试剂盒机制不同,该试剂盒可以让你一次实验就完成5个点突变,还可以用简并核苷酸制备点特异性文库。突变反应或制备文库均可在1天内高效完成,并获得满意结果。该试剂盒要求每个突变位点的对应引物仅带有单个突变寡核苷酸(可使用简并寡核苷酸)。

· QuikChange® Multi多点突变试剂盒与其它Quikchange®设计上有哪些不同?
QuikChange Multi试剂盒的设计非常巧妙,引物、扩增酶和突变模板的制备都很有特点。 QuikChange® Multi 针对每一个突变位点采用一个对应的磷酸化引物,而所有的引物都针对某一 条链设计。试剂盒中的酶混和物是针对进行高效单链多点突变而设计的一种包括 PfuTurbo DNA 聚合酶的特殊配方。

· 使用QuikChange® Multi试剂盒时能用简并核苷酸吗?
可以。该试剂盒要求每个突变位点只有1个寡核苷酸改变,因此可以设计采用简并核苷酸随机替代氨基酸旁链上的某位点。因此,使用者可以用这个试剂盒制备一个质粒上带有各种1-5个氨基酸旁 链的突变的文库。该文库即可用于进行蛋白结构-功能研究和蛋白进化研究的筛查分析。

· QuikChange® 多点突变试剂盒可用的最大质粒有多大? 
已经在8 kb质粒上成功完成了多点突变。

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