 问题解答 |
|
QuikChange® |
|
让突变更加精确和简单 |
|
1天内完成定点诱变的经典试剂盒 |
QuikChange®系列定点突变试剂盒
常见问题解答
· QuikChange®定点突变试剂盒的用途是什么?
QuikChange®和QuikChange® XL用于制备位点特异性突变，氨基酸置换、删除，插入单个或多个氨基酸，但是不会造成任何意外突变。QuikChange®最适合用于小于8 kb的模板，而QuikChange® XL经优化更适合用于大于8 kb模板的突变。QuikChange® Multi采用独特的机制，能在小于8kb的模板上引入5个不同位点的突变或氨基酸置换，而且不会造成任何意外突变。
· 与其它同类产品相比，QuikChange®定点突变试剂盒有哪些优势?
QuikChange®可以从任何双链质粒模板起始，快速方便、可靠高效地制备突变产物。因此用户完全不必进行ssDNA拯救或用其它载体亚克隆。另外，QuikChange®对载体无特殊要求，不需要特别的限制性位点及多步转化操作。该试剂盒包括反应所需的所有试剂，用户不必另行购买其它配套产品。
· QuikChange®系列定点突变试剂盒采用什么方法？
QuikChange® (包括常用型和XL型)：与载体双链分别互补的一对突变引物经温度循环将突变带入新生成的扩增产物中。由于引物经特别设计，每轮扩增开始时，都会只有新的引物与原始模板杂交。整个扩增完成后，用Dpn I处理去除带甲基化的原始模板链。将带缺刻的突变产物转入XL2-Blue 超级感受态细胞，细菌连接酶修复缺刻后，突变质粒即可在细菌中正常复制了。铺板后，80%以上的克隆会带有突变。
QuikChange®多点突变试剂盒可以快速、可靠地在质粒DNA上同时完成5—7个定点突变。每个突变位点设计一个相应的寡核苷酸引物，直接采用双链DNA模板，只需经1天3步的操作即可完成。
根据双链模板之一合成包括突变的引物，PfuTurbo DNA聚合酶在非链置换反应条件下进行高保真扩增，得到双链DNA分子，其中之一带有多突变位点和缺刻。缺刻随即会被试剂盒所带的特殊混和酶封闭。扩增反应产物经Dpn I核酸内切酶消化，去除模板DNA，再转化XL10-Gold超级感受态细胞。
· Quikchange®的哪些特有设计保证了不会产生随机突变?
所有QuikChange试剂盒均带有高保真PfuTurbo DNA聚合酶以最大限度减少碱基错配。另外，起始模板量很小，线性扩增以及扩增循环次数少等都是最低随机突变发生率的保证。
· QuikChange®系列试剂盒采用什么模板？
要求用带甲基化的DNA。大多数种类的大肠杆菌都能对质粒DNA甲基化。只要DNA不是从dcm-或dam-(甲基化缺陷型)菌株中制备的，即可用作该试剂盒的模板。此外，模板DNA应是通过小提或氯化铯纯化制备的。
· QuikChange®系列试剂盒使用的引物必须经纯化吗？
经实验证明，不用SDS-PAGE纯化引物，效率会降低约20%。
· 怎么区分突变质粒和模板质粒?
QuikChange®是根据多数种类的E. coli带有dam甲基化活性，纯化自这些菌株的原模板带有甲基化的现象来去除原模板。Dpn I是专 切甲基化和半甲基化DNA的限制性酶，因此可用于在线性扩增反应后消化原质粒DNA，这种设计保证了突变效率高而背景极低。
|
| 首
页 上一页
下一页 |
|
|
