图1. 以海肾荧光素酶为基础的Rapid Response^TM报告体半寿期的缩短。为了确定报告体的半寿期，将Rapid Response^TM 报告体及合成的海肾荧光素酶对照基因克隆到pGL3-对照载体(E1741)中并用其转化CHO细胞。转录后24小时，加入放线菌酮（终浓度为100μg/ml）。在特定时间点，收集细胞并用海肾荧光素酶检测系统(E2810)测定相对光强度。

Rapid Response^TM 报告载体中的hRluc基因与Promega公司合成的海肾荧光素酶报告载体中的相同。另外，为了提高Rapid ResponseTM 报告的可信度，系统地消除了存在于萤火虫及海肾荧光素酶和蛋白降解序列CL1及PEST 中已知的保守的转录因子结合位点。合成的 报告基因被分别命名为hRluc+及hRluc，相应的蛋白降解序列被分别命名为hCL1及hPEST。由于不被翻译，ARE mRNA降解序列未重新设计。

放线菌酮（终浓度为100μg/ml）。在特定时间，收集细胞并用荧光素酶或海肾荧光素酶检测系统测定相对光强度。从3小时到 大约1小时， 由于PEST降解序列的存在，hRlucP的半寿期缩短了超过60%。加入CL1，PEST，及ARE对半寿期的影响最大；在0.4小时，hRlucCP的半寿期缩短了超过80%（图1）。用以萤火虫荧光素酶为基础的Rapid Response^TM 报告体，也得到了相同的结果（数据未显示）。

应答时间缩短，放大倍数提高
    有两种编码萤火虫荧光素酶及两种编码海肾荧光素酶（图2）的四种Rapid Response^TM 报告载体可供选择。pGL3(R2.1)-基本型及pGL3(R2.2)-基本型载体编码萤火虫荧光素酶并含有hlucP+及hlucCP+基因。同样，phRG(R 2.1) -基本型及phRG(R 2.2) -基本型载体编码海肾荧光素酶并含有hRlucP及hRlucCP基因（图2）。

    为了确定降低报告体稳定性的同时是否也减少了最大应答所需时间，将含有多个cAMP应答元件（CREs）的DNA片段克隆到Rapid Response^TM载体并用其转化HEK293 细胞。用肾上腺素受体类似物异丙肾上腺素（ISO）诱导细胞，并测定荧光素酶的表达。