英茂盛业细胞基因敲除技术取得重大突破，大幅降低了细胞基因编辑成本。为回馈客户，我们特展开细胞基因敲除金秋大优惠！

价格极低――仅1.6万元/基因
成功率高――不成功不收费！
工期短――仅8-10周
高质量――提供基因组鉴定的单克隆细胞株
应用广泛――绝大多数哺乳动物细胞均可敲除

技术原理：

我们采用Cas9蛋白与重组修复蛋白融合技术，我们大幅提高了细胞基因敲除的重组修复效率。通过新技术我们将细胞基因敲除工期缩短2个月以上，重组效率增加10倍以上，同时细胞基因敲除成本大幅下降。

图1   Cas9-HR融合蛋白介导的重组基因编辑原理

技术应用：

将EGFP基因敲入293T-mito-mcherry细胞株
293T-mito-mcherry细胞株是我们以前构建的稳定表达线粒体定位的mcherry荧光蛋白细胞株，细胞基因组稳定整合mito-mcherry基因。我们根据mito-mcherry基因序列，在mcherry基因下游设计了Cas9靶点和EGFP（2A）Bsd重组修复模板。通过将ssDNA重组模板、Cas9融合蛋白、sgRNA电转293T-mito-mcherry细胞株，经blasticidin筛选获得大量克隆子。经鉴定，正确率大于90%。

实验设计：

图2   EGFP敲入mcherry下游实验设计

图3   基因组DNA PCR鉴定。M：DL2000 marker；1：未编辑细胞；
2~7：编辑后单克隆细胞，除5号克隆杂合外，其他均为纯合阳性克隆。

图4    3号克隆荧光成像结果显示mcherry和EGFP定位相同。