miRNA测序流程的一个突出问题是接头二聚体污染的存在。尽管跑胶可以去除接头二聚体和污染性RNA,但繁琐的样品处理不可避免会造成样品损失,并且即使在切除凝胶后,仍然存在着序列读取偏高的可能性。
标准的QIAseq miRNA操作不需要跑胶纯化、切胶和洗脱,避免了大量的样品处理/损失,也节省了时间。优化的流程可生成出色的数据。
左图显示,在经过一个包含磁珠纯化的基本操作之后,QIAseq miRNA表现出稳定的miRNA文库,不含接头二聚体或污染性RNA。与竞争试剂盒生成的文库相比(之前必须进行繁琐的凝胶切除),QIAseq带来的miRNA文库更加稳定,没有接头二聚体和污染RNA。
QIAseq miRNA Library Kit全面优化了文库制备过程,专利的寡核苷酸修饰几乎避免了接头二聚化,即使是极低的起始总RNA也不怕。此外,反应过程也有助于制备出消除偏向和背景污染的、稳健的miRNA文库。这些优势使得可测序的miRNA产量最大化。
由于循环miRNA有望作为生物标志物,QIAseq miRNA Library Kit经过了精心优化,可比对超低起始量的miRNA,适用于循环miRNA建库。此外,这个试剂盒将特异性分子条码(UMI)整合到逆转录过程中,通过NGS对成熟miRNA进行无偏向且准确的完整miRNA组定量。