基于农杆菌介导的CRISPR/Cas9基因编辑技术突破苤蓝遗传转化难题

本研究首次建立了苤蓝（Brassica oleracea var. gongylodes）的农杆菌介导遗传转化体系，通过添加5 mg L?1 AgNO3抑制褐化、优化除草剂施用策略，成功获得BoCPC基因编辑突变体，为苤蓝品种改良提供关键技术支撑。

　　

苤蓝（Brassica oleracea var. gongylodes）作为重要经济作物，因其复杂的离体再生体系长期缺乏遗传转化研究。研究人员通过农杆菌（Agrobacterium tumefaciens）递送靶向BoCPC（CAPRICE）基因的CRISPR/Cas9系统，该基因编码含R3 MYB结构域的转录因子。针对六种苤蓝栽培种的测试表明，传统转化方法均无效。新开发的方案通过在培养基中添加5 mg L^?1 AgNO₃显著减轻接种后褐化现象，并采用限时除草剂处理使芽伸长效率提升四倍且实现有效生根。从250个外植体中分别获得维也纳白（Vienna White）5株、古利弗（Gulliver）2株、美味白（Delicacy White）1株草铵膦抗性芽。PCR检测显示仅3株维也纳白携带Cas基因，其中两株BoCPC表达显著下调，一株存在547-bp缺失（杂合或嵌合体）。该突破性技术为苤蓝农艺性状改良奠定基础，并确立维也纳白为模式栽培种。