基于粘性末端驱动无PAM限制的RPA-CRISPR/Cas12a双重放大系统实现KRAS G12C超灵敏检测

来自国内的研究人员开发了一种无需PAM位点的CRISPR/Cas12a耦合RPA荧光生物传感平台，用于KRAS G12C单碱基突变检测。该策略通过粘性末端dsDNA激活Cas12a反式切割活性，实现10 aM–10 pM线性检测范围及1.5 aM检测限，可区分0.1%突变基因并具备优异实际样本检测性能。

　　

研究人员构建了一种新型荧光生物传感平台，通过CRISPR/Cas12a与重组酶聚合酶扩增（RPA）协同作用，实现了无需原型间隔序列邻近基序（PAM）的KRAS G12C单碱基突变超灵敏检测。该技术利用HindIII酶切特性将目标基因序列切割成含粘性末端的双链DNA（dsDNA），这些特殊末端能高效激活Cas12a的反式切割（trans-cleavage）活性，从而产生强烈荧光信号。该策略在10 aM（阿摩尔）至10 pM（皮摩尔）范围内呈现优异线性关系，检测限低至1.5 aM。更令人瞩目的是，在总基因浓度为10 pM的背景下，该方法可精准区分低至0.1%的KRAS G12C突变，并在实际样本检测中展现出卓越的应用潜力。