靶向PSPC1增强鼻咽癌放射敏感性并抑制上皮间质转化与转移的机制研究

本研究揭示了Paraspeckle组分1（PSPC1）在鼻咽癌（NPC）放射抵抗和转移中的关键作用。通过CRISPR/Cas9技术构建PSPC1敲除（KO）模型，证实其缺失可诱导G2/M期阻滞、促进辐射后凋亡，并抑制细胞迁移侵袭。该研究为克服NPC放射抵抗提供了新靶点，提示靶向PSPC1或其互作蛋白SFPQ可能成为临床治疗新策略。

　　

亮点解析

细胞系与培养

人鼻咽癌细胞系CNE2由福建省肿瘤医院放射生物学与肿瘤学实验室培养。放射性抵抗细胞系R743通过既往报道方法[24]从原始CNE2细胞中衍生，同样培养于福建省肿瘤医院放射生物学与肿瘤学实验室。细胞采用含10%胎牛血清的RPMI-1640培养基（Gibco盖瑟斯堡MD），在37℃、5% CO₂的湿润培养箱中培养。

PSPC1敲除R743与过表达CNE2细胞系的构建

PSPC1参与包括基因表达调控和应激反应在内的多种细胞过程。本研究通过RT-qPCR和蛋白质印迹分析检测放射性敏感细胞CNE2与放射性抵抗细胞R743中PSPC1的表达水平。结果显示，与放射性抵抗的R743细胞相比，放射性敏感的CNE2细胞中PSPC1表达显著降低（图1A-C）。

为明确PSPC1在NPC放射抵抗中的具体作用，采用CRISPR/Cas9基因组编辑技术构建PSPC1敲除的R743细胞系，同时通过pcDNA3.1(+)-PSPC1质粒转染建立PSPC1过表达的CNE2细胞系（命名为pcD-PSPC1）。通过Western blot验证敲除效率（图1D），并通过克隆形成实验评估细胞放射性敏感性变化（图1E-F）。结果表明，PSPC1敲除使R743细胞从放射抵抗转为放射敏感，而过表达则显著增强CNE2细胞的放射抵抗能力。

讨论

本研究探讨了PSPC1表达是否对NPC的放射抵抗和转移至关重要。使用NPC R743-KO3细胞系，我们发现PSPC1敲除可增强放射敏感性。细胞周期分析显示PSPC1缺失导致显著的G₂/M期阻滞。此外，PSPC1敲除增加了辐射后细胞凋亡，并降低了NPC细胞的侵袭和迁移能力。在裸鼠实验中，PSPC1敲除增强了移植瘤的放射敏感性。这些发现表明，靶向PSPC1可能为克服NPC放射抵抗和转移提供新治疗策略。

结论

本研究表明PSPC1表达是促进辐射后NPC细胞存活和转移的关键因素。因此，靶向PSPC1或其相关下游通路可能为克服NPC放射抵抗和转移提供新策略。