转基因牛滋养层干细胞系的建立及其基因编辑与分泌组学特征解析

本研究通过慢病毒转导SV40大T抗原成功构建了具有稳定增殖能力的转基因牛滋养层干细胞系（bTSC），在ROCK抑制剂维持下保留关键形态与转录特征。研究团队利用CRISPR/Cas9基因编辑技术实现EGFP位点高效敲除，并通过蛋白质组学鉴定出与胚胎-子宫互作相关的分泌蛋白，为牛胎盘发育机制研究提供了重要体外模型。

　　

研究人员通过慢病毒介导的猴空泡病毒40大T抗原（simian vacuolating virus 40 large T antigen）转导，从牛囊胚中成功获得转化型滋养层干细胞系（bTSC）。这些细胞在 Rho 关联蛋白激酶（ROCK）抑制条件下保持快速增殖能力，并保留牛滋养层干细胞的典型形态学特征和转录组特征。经转化生长因子β（TGF-β）诱导分化后，细胞表现出与滋养层成熟过程一致的形态变化和分子表型。

通过慢病毒载体稳定导入tdTomato和EGFP报告基因，并运用CRISPR/Cas9基因编辑技术靶向切除慢病毒整合的EGFP位点，研究团队验证了在该细胞系中实现高效基因敲除的可行性。对条件培养基的蛋白质组学分析揭示了多个可能参与胚胎-子宫对话的分泌蛋白，这些因子与既往报道的牛概念体分泌组具有高度一致性。

该项工作建立的转基因bTSC模型为研究牛滋养层生物学、基因功能验证以及滋养层-子宫内膜信号通讯机制提供了可再生的体外研究平台，有助于深入解析牛早期妊娠过程的分子调控机制。