双AAV载体高效递送大片段转基因的策略与应用

来自国际团队的研究人员开发了一种基于双AAV载体（adeno-associated viral vectors）的高效递送大片段转基因（>5 kb）的标准化方案，涵盖基因组、转录本和蛋白质三个层面的重组策略。该研究提供了从载体设计、生产到体内外功能验证的全流程指导，成功在人多能干细胞来源视网膜类器官和小鼠模型中实现稳定表达，为基因治疗和CRISPR技术应用提供了关键工具。

　　

尽管腺相关病毒（AAV）载体的载荷能力有限（<5 kb），其仍是体内递送治疗性基因的金标准。为突破这一限制，研究人员提出三种双AAV载体策略：通过基因组、转录本或蛋白质水平的重组实现大片段基因递送。本方案详细阐述了双AAV载体的设计原则、克隆构建、体外表达效率评估以及载体生产流程。此外，研究团队在人多能干细胞（iPSC）分化的视网膜类器官模型中验证了载体功能，并系统评估了小鼠经不同途径给药后各组织中转基因RNA和蛋白质的表达情况。该协议可适配多种模式生物及人类类器官培养体系，全程耗时约15–44周，为大规模基因治疗工具的开发提供了标准化技术支撑。