基于PCR-CRISPR/Cas12a的荧光与侧流层析双平台高效筛选CD71双等位基因突变体

（编辑推荐）本研究创新性开发了基于PCR-CRISPR/Cas12a的检测系统，通过荧光报告和侧流层析试纸条（LFD）技术，实现了CRISPR/Cas9诱导的CD71双等位基因突变体的快速精准筛查。该系统兼具高特异性（区分单/双等位突变）、高灵敏度（1小时完成检测）和低成本优势，为基因编辑研究提供了高效工具。

　　

Highlight

CRISPR/Cas9基因编辑技术通过精确的基因插入、敲除和替换显著加速了功能基因组学研究。由于其高效性和精准性，该系统已广泛应用于增强抗病性、提高生产性能等领域。这些研究进展很大程度上依赖于特定靶基因的双等位基因编辑。然而，目前仍缺乏快速、低成本且操作简便的双等位突变细胞克隆筛选方法。

Discussion

CRISPR/Cas12a系统作为V型CRISPR/Cas家族的RNA引导DNA内切酶，其非特异性反式切割（trans-cleavage）活性为分子检测提供了新思路。本研究中，我们利用该特性开发的双平台检测系统，在CD71基因编辑位点展现出优异的鉴别能力。值得注意的是，侧流层析试纸条（LFD）平台仅需5分钟即可实现肉眼判读，这种"所见即所得"的特性使其特别适合资源有限的实验室环境。

Conclusion

综上所述，我们开发的PCR-CRISPR/Cas12a检测系统为CRISPR/Cas9诱导的CD71双等位突变体筛选提供了高效解决方案。该方法展现出"三高"特性：高特异性（准确区分基因型）、高灵敏度（检测限达10^-12 M）和高效率（1小时内完成），同时具备"两低"优势：低成本（较测序费用降低80%）和低技术门槛。这项研究为基因编辑领域的突变体筛选提供了新的技术范式。