基于单克隆抗体的传染性胃肠炎病毒S2蛋白新型线性B细胞表位鉴定及其结构功能研究

本研究针对传染性胃肠炎病毒(TGEV)S2蛋白抗原表位不清的问题，通过原核表达系统成功制备重组S2蛋白，获得特异性单克隆抗体12G8，鉴定出高度保守的线性B细胞表位1109QGQALS1114，定位在HR1结构域α螺旋区。该发现为开发广谱诊断工具和靶向疫苗提供了新靶点，对防控猪群冠状病毒感染具有重要意义。

　　

在养猪业中，传染性胃肠炎病毒(TGEV)犹如一个"隐形杀手"，能导致仔猪严重腹泻、脱水甚至死亡，给全球畜牧业造成巨大经济损失。这种冠状病毒通过其表面的刺突蛋白(S蛋白)入侵宿主细胞，其中S1亚基负责识别受体但变异频繁，而S2亚基在介导膜融合过程中高度保守，却鲜有研究关注其抗原表位特征。面对S1蛋白作为诊断靶标稳定性不足的困境，来自河南农业大学的Jinhui Hou、Ruifeng Hou和Hao Lu等研究者将目光投向了更具保守优势的S2蛋白。

研究人员采用原核表达系统制备重组TGEV S2蛋白，免疫BALB/c小鼠获得单克隆抗体12G8。通过ELISA、Western blot和间接免疫荧光验证其特异性后，采用重叠肽扫描策略精确定位表位，结合AlphaFold3预测蛋白三维结构。样本来源于实验室保存的TGEV HN-2012毒株感染的猪睾丸(ST)细胞。

研究结果部分：

"TGEV S蛋白结构预测与保守性分析"显示，S2亚基的HR1和HR2结构域在16个TGEV毒株中保持100%保守，显著高于变异频繁的S1亚基。在"TGEV S2蛋白表达与纯化"中，研究者成功表达98.12 kDa的重组蛋白，Western blot验证其能被His标签抗体和阳性血清识别。

"TGEV S2蛋白单抗制备与筛选"获得IgG2b/kappa型的12G8单抗，特异性识别天然TGEV毒株和重组S2蛋白。随后的"交叉反应性分析"证实该单抗不与猪δ冠状病毒(PDCoV)、猪流行性腹泻病毒(PEDV)等常见猪肠道病毒发生交叉反应。

"TGEV S2蛋白表位鉴定"通过系统截短策略，最终锁定最小表位序列¹¹⁰⁹QGQALS¹¹¹⁴。在"表位保守性与结构域分析"中，该表位在TGEV毒株间完全保守，三维结构显示其位于HR1结构域两个环之间的α螺旋区，该区域在病毒膜融合过程中发挥关键作用。

这项研究首次在TGEV S2蛋白HR1结构域鉴定出高度保守的线性B细胞表位，为开发不受病毒变异影响的诊断方法奠定基础。虽然原核表达系统产生的单抗未显示中和活性，但表位定位为设计靶向膜融合过程的干预策略提供了新思路。研究者建议未来采用真核表达系统优化蛋白构象，可能有助于获得具有中和活性的抗体。该发现不仅丰富了冠状病毒S蛋白的抗原认知，也为跨毒株疫苗设计提供了理论依据，对保障养猪业健康发展具有重要意义。论文发表在《BMC Veterinary Research》期刊。