ZC3H13通过m6A甲基化调控M2巨噬细胞浸润促进食管鳞癌进展的机制研究

本文揭示了ZC3H13通过介导m6A甲基化修饰调控CXCL8/CCL5表达，驱动M2型肿瘤相关巨噬细胞（TAMs）极化与浸润，从而重塑食管鳞癌（ESCC）免疫微环境的关键机制。研究结合生信分析、细胞模型与动物实验，证实ZC3H13-WTAP-METTL3/14复合物核转位异常导致CXCL8 mRNA稳定性增强，通过CXCL8-CXCR2轴促进M2极化，同时CCL5介导M0巨噬细胞迁移，最终加速ESCC进展。该研究为靶向m6A-免疫微环境交互作用提供了新策略。

　　

1 Introduction

食管鳞癌（ESCC）作为高侵袭性肿瘤，其发生发展与m⁶A RNA甲基化修饰密切相关。ZC3H13作为m⁶A甲基转移酶复合物（MACOM）核心成员，在多种肿瘤中呈现双向调控作用，但其在ESCC免疫微环境中的功能尚未阐明。研究团队通过TCGA数据库分析发现，ESCC组织中ZC3H13表达显著升高，且与m⁶A修饰水平及M2巨噬细胞浸润呈正相关。

2 Materials and methods

采用40例ESCC临床样本及KYSE-150/KYSE-410细胞系，通过CRISPR-Cas9构建ZC3H13敲除/突变模型。实验涵盖qRT-PCR、Western blot（WB）、免疫组化（IHC）等技术检测基因表达，Transwell和CCK-8评估细胞迁移增殖，CDX小鼠模型验证体内效应。关键创新点包括：

1. 1.

   设计特异性靶向CXCL8 mRNA第5位点（5'-UTR区）的A→T突变体

2. 2.

   使用METTL3-METTL14异源二聚体抑制剂SAH阻断m⁶A修饰

3. 3.

   CXCR2拮抗剂SX-682干预巨噬细胞极化

3 Result

3.1 ZC3H13-m⁶A-免疫浸润三联关联

临床样本显示ZC3H13在ESCC组织表达量较癌旁高3.2倍（p<0.001），且m⁶A水平与ZC3H13表达呈强相关（Pearson r=0.646）。免疫荧光证实ZC3H13缺失导致METTL3/14核定位异常，CD163⁺ M2巨噬细胞在癌巢周边富集。

3.2 双通路调控机制

CXCL8轴：ZC3H13通过m⁶A修饰增强CXCL8 mRNA稳定性（半衰期延长2.4倍），分泌的CXCL8与巨噬细胞膜CXCR2结合诱导M2极化（CD206⁺细胞占比下降58%）。

CCL5轴：非m⁶A依赖性上调CCL5表达，促进M0巨噬细胞趋化迁移（Transwell细胞数增加3.1倍）。

3.3 功能验证

M2条件培养基使ESCC细胞：

• •

  增殖率提升210%（EdU染色）

• •

  侵袭能力增强（基质胶穿透数增加4.7倍）

• •

  克隆形成率提高3.8倍

4 Discussion

该研究首次揭示ZC3H13通过"甲基化-趋化因子"双开关调控ESCC免疫微环境：

1. 1.

   结构域分析显示ZC3H13^1-1460片段对维持WMM复合物核转位至关重要

2. 2.

   临床转化价值：CXCR2抑制剂SX-682联合抗CXCL8抗体可逆转M2极化

3. 3.

   局限性：需在PDX模型验证靶向治疗可行性

5 Conclusion

研究阐明ZC3H13-m⁶A-CXCL8/CCL5信号轴促进ESCC进展的分子机制，为开发基于m⁶A修饰的免疫治疗提供新靶点。未来需探索ZC3H13与其他免疫检查点（如PD-L1）的协同调控网络。