尿激酶型纤溶酶原激活物缺陷通过增强CD8+T细胞浸润协同抗PD-1治疗前列腺癌的机制研究

本研究揭示了尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）在前列腺癌免疫微环境中的关键作用。通过临床样本分析和小鼠模型实验，证实uPA高表达与CD8+T细胞浸润负相关，其缺失或抑制剂（UK122）可显著增强CD8+T细胞毒性（GzmB/IFN-γ/TNF-α分泌）并上调PD-1表达，与抗PD-1疗法产生协同抗肿瘤效应，为前列腺癌免疫治疗提供新靶点。

　　

3.1 人类前列腺癌中uPA高表达与CD8⁺T细胞浸润负相关

免疫组化分析显示，前列腺癌组织中uPA表达显著高于癌旁组织，而CD8⁺T细胞浸润呈现相反趋势。定量分析证实uPA表达水平与CD8⁺T细胞密度呈负相关（R=-0.38, P=0.026），提示uPA可能是免疫抑制微环境的关键调控因子。

3.2 uPA缺陷抑制前列腺癌进展

通过uPA基因敲除（uPA^–/–）小鼠模型和UK122抑制剂干预实验，发现两者均能显著抑制RM-1前列腺癌细胞移植瘤生长（uPA^–/–组肿瘤体积较野生型减少83%），并延长小鼠生存期。值得注意的是，基因敲除比药物抑制表现出更强的抗肿瘤效果。

3.3 uPA缺陷通过激活抗肿瘤免疫发挥作用

RNA测序发现uPA^–/–组有2,384个基因上调，涉及T细胞受体信号、PD-1/PD-L1检查点等通路。肿瘤组织内细胞毒性标志物（GzmB、IFN-γ、TNF-α）的表达和血清水平均显著升高，证实uPA缺陷重塑了免疫微环境。

3.4 uPA缺陷增强CD8⁺T细胞功能

CIBERSORT和CyTOF分析显示uPA^–/–组CD8⁺T细胞比例增加而髓系细胞减少。体外实验证实uPA^–/–CD8⁺T细胞具有更强的迁移能力和杀伤活性——在效应靶比8:1时，抗CD19 CAR-T细胞对RM1-CD19细胞的杀伤效率达67.66%，是野生型的3.2倍。

3.5 CD8⁺T细胞依赖性机制验证

CD8⁺T细胞清除实验显示，抗体处理后uPA^–/–组肿瘤体积仍比野生型对照组小21%，说明除CD8⁺T细胞外，uPA缺陷可能通过其他途径抑制肿瘤。

3.6 uPA缺陷促进PD-1⁺CD8⁺T细胞积累

转录组和流式细胞术发现uPA^–/–组PD-1表达显著升高。多重免疫荧光显示肿瘤内PD-1⁺CD8⁺T细胞比例增加，这种"衰竭前体"状态为联合免疫治疗奠定基础。

3.7 UK122与抗PD-1的协同效应

联合治疗组肿瘤体积（100.16 mm³）显著小于单药组，其机制在于UK122促进T细胞浸润而抗PD-1逆转衰竭。值得注意的是，联合组CD8⁺T细胞浸润水平未超过UK122单药组，提示功能恢复比数量增加更重要。

讨论与展望

该研究首次系统阐明uPA通过双重机制调控前列腺癌免疫微环境：既限制CD8⁺T细胞浸润，又促进其功能衰竭。临床转化方面，建议采用uPA缺陷型CD8⁺T细胞过继疗法联合PD-1抑制剂。未来需深入探索uPA调控PD-1表达的表观遗传机制，以及其在其他免疫检查点（如LAG-3、CTLA-4）中的作用。