CRISPR/dCas9双编码微球技术：转基因玉米多重检测的新突破

这篇研究创新性地将CRISPR/dCas9系统与双编码（尺寸/拉曼指纹）磁珠技术结合，开发了可同时检测6种转基因玉米事件（如MON810、BT11等）的多重核酸检测平台。通过dCas9/sgRNA复合物特异性识别靶标dsDNA，结合SYBR Green I荧光信号与聚合物拉曼解码，实现了98%准确率的qPCR级检测，为转基因作物监管和病原体筛查提供了新工具。

　　

Highlight

针对CRISPR/dCas9系统单靶点检测的局限性，本研究创新引入尺寸与拉曼双编码技术，实现了多重靶标核酸的高特异性同步检测。通过设计不同尺寸的聚合物包被磁珠（MB@polymer）及其独特拉曼指纹，结合dCas9/sgRNA复合物对转基因序列的特异性捕获能力，在SYBR Green I荧光标记下，成功建立了可同时识别6种抗虫转基因玉米事件（如DBN9501、MON89034等）的检测体系。

Screening of sgRNAs for dCas9 According to GM Maize Sequences

采用琼脂糖凝胶电泳验证dCas9/sgRNA复合物与靶标dsDNA的结合效率。实验中将1 μL dCas9（0.5 μg/μL）与0.8 μL sgRNA（1 μg/μL）室温孵育10分钟形成复合物，再与4 μL dsDNA（50 ng/μL）、PBS缓冲液及MgCl₂（40 mM）混合。通过Benchling工具设计的sgRNAs（如针对MON810的3条高评分sgRNA）经筛选后，显著提升了系统对BT176、MON88017等事件的识别精度。

Conclusions

本研究通过整合尺寸编码磁珠与拉曼解码技术，突破了CRISPR/dCas9单靶点检测瓶颈。所构建的多重传感平台不仅适用于转基因作物精准检测（与qPCR一致性达98%），更在病原体诊断、遗传病筛查等领域展现出广阔应用前景。