新型乙基桥联-1,2,4-三唑吡啶酮衍生物的合成及其在癌症治疗中的潜力研究

本文设计合成了一系列新型乙基桥联-1,2,4-三唑吡啶酮衍生物（5a-f），通过1H-NMR、13C-NMR和LC-QTOF-MS表征结构，并采用DPPH法评估抗氧化活性。MTT实验表明化合物5a对MCF-7、MDA-MB-231乳腺癌细胞株具有显著细胞毒性，流式细胞术证实其通过调控Bcl2/Bax/Casp9基因表达诱导凋亡，分子对接揭示其与Bcl2（PDB:6QGG/4IEH）及微管蛋白（1SA0）靶点的强结合力，为乳腺癌靶向治疗提供新候选分子。

　　

亮点

本研究通过五步反应合成乙基桥联-1,2,4-三唑吡啶酮衍生物（5a-f），其中化合物5a展现出显著的抗癌潜力。

化学合成

以对氯苯乙酮和乙醛酸一水合物为起始原料，经肼解环合构建吡啶嗪-3(2H)-酮母核（2），再与乙基-3-氨基-1,2,4-三唑缩合获得目标产物。

细胞培养条件

MCF-7、MDA-MB-231和L929细胞系在含10%胎牛血清（FBS）的DMEM培养基中，于37°C、5% CO₂条件下培养。

MTT实验

采用梯度浓度（100-3.125 μg/mL）测试化合物活性，5a对MDA-MB-231的IC₅₀值最优，通过Olympus细胞计数器定量检测存活率。

细胞凋亡分析

Annexin V-FITC/PI双染显示5a显著提升MDA-MB-231细胞早期凋亡率（p≤0.005），流式细胞术精准捕捉凋亡动态。

qPCR检测

使用RNeasy Mini Kit提取RNA，UV-VIS定量显示5a下调Bcl-2抗凋亡基因，同时激活Bax和Caspase-9促凋亡通路。

显微镜成像

Olympus显微成像直观呈现5a诱导的细胞形态学改变，如膜起泡和核碎裂等典型凋亡特征。

细胞周期分析

Muse?试剂盒揭示5a将MDA-MB-231阻滞于G2/M期，证实其通过干扰微管功能抑制癌细胞增殖。

统计方法

数据以x±SD表示，SPSS 22.0进行ANOVA和Tukey检验，三组独立实验验证显著性（p≤0.005）。

结论

5a通过多重机制（基因调控、周期阻滞、凋亡诱导）发挥抗癌作用，分子对接证实其与Bcl-2和微管蛋白的强结合力，为乳腺癌靶向药物开发提供新思路。