巴西莓叶乙醇提取物通过抗炎、抗氧化和抗菌作用促进伤口愈合的机制研究

这篇研究揭示了巴西莓叶乙醇提取物(EEPC)在伤口愈合中的多靶点作用机制。通过UHPLC-MS分析鉴定出13种活性酚类化合物，其中没食子酸含量最高(319.5 μg/mg)。EEPC展现出显著的抗氧化活性(DPPH法IC50=4.42±0.91 μg/mL)，能降低63%活性氧(ROS)生成和63.69%脂质过氧化。其抗炎作用表现为使IL-1β和TNF-α水平分别降低40%和74%，同时对铜绿假单胞菌和白色念珠菌的最小抑菌浓度(MIC)为250 μg/mL，并能减少95.40%金黄色葡萄球菌生物膜粘附。值得注意的是，EEPC可促进95.40%成纤维细胞迁移，为开发新型伤口治疗药物提供了科学依据。

　　

植物材料与提取物制备

研究采用巴西莓叶为原料，通过乙醇提取获得粗提物(EEPC)。采集地点位于巴西米纳斯吉拉斯联邦大学(UFMG)校园内，经植物学家鉴定为Plinia cauliflora (DC.) Kausel (桃金娘科)。提取过程采用室温乙醇浸提法，经旋转蒸发浓缩后获得深褐色提取物，储存于5℃备用。

植物化学成分分析

采用UHPLC-QTOF-MS技术鉴定出EEPC中含有13种活性成分，主要包括奎宁酸、表儿茶素、杨梅酮衍生物、槲皮素衍生物以及含量最高的没食子酸(319.5 μg/mg)。HPLC-DAD定量分析显示，除没食子酸外，还含有芦丁(74.0 μg/mg)、表儿茶素(17.55 μg/mg)和槲皮素(1.19 μg/mg)。总酚含量测定结果为310.42±8.75 μg/mg(以单宁酸当量计)，其中单宁含量为108.56±0.39 μg/mg，黄酮含量为36.80±3.44 μg/mg(以芦丁当量计)。这些酚类化合物被认为是EEPC生物活性的物质基础。

细胞安全性评价

通过MTT法评估了EEPC对BALB/c小鼠腹腔巨噬细胞和L929成纤维细胞的细胞毒性。结果显示，在18.75-300.00 μg/mL浓度范围内，细胞存活率均高于70%的国际安全标准。特别值得注意的是，在最高测试浓度(300 μg/mL)下，两种细胞的存活率仍保持良好，表明EEPC具有较好的生物相容性，为其后续生物活性研究提供了安全性依据。

抗氧化作用机制

EEPC展现出全面的抗氧化活性：

1. 1.

   DPPH自由基清除实验显示IC₅₀为4.42±0.91 μg/mL，虽低于阳性对照槲皮素(0.33±0.12 μg/mL)和芦丁(1.71±0.22 μg/mL)，但仍表现出显著活性；

2. 2.

   在巨噬细胞模型中，EEPC各测试浓度均能显著降低ROS生成，最高降低63%；

3. 3.

   磷钼络合物还原实验显示其总抗氧化能力相当于芦丁的199.72±2.34%；

4. 4.

   β-胡萝卜素/亚油酸系统实验中，EEPC对脂质过氧化的抑制率达52.09%，显著高于槲皮素(25.20%)；

5. 5.

   在8天的MDA形成抑制实验中，EEPC表现出与阳性对照BHT相当的抑制效果。这些结果证实EEPC可通过多途径发挥抗氧化作用。

抗炎作用研究

EEPC表现出显著的抗炎活性：

1. 1.

   抑制NO生成，IC₅₀为76.12±9.41 μg/mL，在300 μg/mL时抑制率达89%；

2. 2.

   显著减少脂滴(LDs)积累，在150和300 μg/mL浓度下分别降低44%和40%；

3. 3.

   降低PGE₂产生达52%；

4. 4.

   显著抑制促炎细胞因子释放：在300 μg/mL时，对TNF-α、IL-6、IL-1β和IL-12的抑制率分别为74%、96%、40%和64%。这些结果表明EEPC可通过调节多种炎症介质发挥抗炎作用。

抗菌活性评估

EEPC对常见伤口感染病原体表现出抑制活性：

1. 1.

   对铜绿假单胞菌和白色念珠菌的MIC均为250 μg/mL，具有杀菌作用；

2. 2.

   对金黄色葡萄球菌和大肠杆菌的MIC分别为500和1000 μg/mL；

3. 3.

   在72小时生长动力学实验中，EEPC能持续抑制细菌生长；

4. 4.

   最显著的是对金黄色葡萄球菌生物膜形成的抑制，在2MIC浓度下抑制率达95.40%，优于阳性对照阿奇霉素。这些发现为EEPC用于感染性伤口治疗提供了实验依据。

促伤口愈合作用

划痕实验证明EEPC能显著促进L929成纤维细胞迁移：

1. 1.

   在18.75 μg/mL浓度下，24和48小时迁移率分别为91.45%和97.66%；

2. 2.

   在37.50 μg/mL浓度下，相应迁移率为81.61%和97.81%；

3. 3.

   迁移效果显著优于对照组(24小时23.03%，48小时69.97%)。这种促迁移作用可能与EEPC中富含的黄酮类和单宁类化合物有关，它们能促进细胞外基质沉积和组织重塑。

研究意义与展望

该研究首次系统评价了巴西莓叶乙醇提取物的伤口愈合活性，发现其通过抗氧化、抗炎、抗菌和促细胞迁移等多重机制发挥作用。特别值得注意的是，研究聚焦于常被丢弃的叶片部位，既提高了农业副产物的附加值，又符合联合国可持续发展目标。然而，研究仍存在一些局限，如缺乏体内实验和长期安全性评估，这些将是未来研究的重要方向。总体而言，该工作为开发新型植物源伤口治疗药物奠定了重要基础。