解除分子刹车：CREM缺失超级增强CAR-NK细胞的抗肿瘤功能

Rafei团队在《Nature》发表的研究揭示了转录因子CREM作为CAR-NK细胞功能的关键负调控因子，通过整合CAR激活和IL-15信号抑制细胞毒性。该研究通过CRISPR-Cas9敲除CREM显著提升CAR-NK对肾癌、淋巴瘤等多种肿瘤的杀伤效果，为优化"现货型"免疫疗法提供新靶点。

　　

在癌症免疫治疗领域，CAR-NK细胞疗法因其无需严格配型、不易引发移植物抗宿主病(GvHD)等优势备受关注。然而与传统T细胞疗法相比，CAR-NK细胞仍面临持久性不足、肿瘤浸润能力有限等瓶颈。这些限制背后的分子机制尚不明确，特别是如何平衡细胞活化和耗竭的关键调控节点亟待破解。Rafei团队在《Signal Transduction and Targeted Therapy》发表的这项研究，首次揭示转录因子cAMP响应元件调节因子(CREM)作为CAR-NK细胞的"分子刹车"，为突破当前技术瓶颈提供了全新视角。

研究采用单细胞转录组测序、CRISPR-Cas9基因编辑、质谱流式细胞术(CyTOF)、染色质可及性分析(ATAC-seq)等技术，主要基于Raji淋巴瘤小鼠模型和包括肾癌、胰腺癌等在内的多种肿瘤细胞系。通过构建不同信号域结构的CD70-CAR载体，结合IL-15梯度刺激实验，系统解析了CREM的调控网络。

CREM作为双信号整合枢纽

单细胞分析显示，CREM表达与CAR-NK细胞抗肿瘤活性峰值及颗粒酶(GZMB/GZMH)等效应分子表达高度同步。值得注意的是，CREM-high细胞同时高表达KIR2DL3等抑制性受体，呈现典型耗竭特征。机制研究发现，CAR激活通过免疫受体酪氨酸激活基序(ITAM)信号，而IL-15则通过PKA-CREB和STAT5双通路协同诱导CREM，其中PKA-CREB起主导作用。

基因敲除的突破性效应

CRISPR-Cas9敲除CREM后，CAR-NK细胞对淋巴瘤、卵巢癌等肿瘤的杀伤效率显著提升，干扰素-γ(IFN-γ)分泌增加2-3倍。在重复肿瘤刺激实验中，CREM KO细胞展现出更强的持久性和抗耗竭能力。动物实验证实，CREM缺失的CAR70-IL-15 NK细胞使淋巴瘤模型生存期延长40%，在乳腺癌和胰腺癌模型中也观察到类似效果。

表观遗传层面的证据

ATAC-seq和ChIP-seq分析揭示，CREM通过占据免疫相关基因的调控区域（如TNF基因座）发挥双向调控作用。CREM缺失导致染色质开放状态重组，促进效应功能相关基因的表达而抑制耗竭程序。

这项研究不仅阐明CREM是CAR与IL-15信号交叉对话的核心介质，更开创性地证明解除这一"分子刹车"可同步增强细胞毒性和持久性。相较于当前聚焦PD-1等膜表面检查点的策略，靶向CREM这一细胞内调控节点有望开发出更安全、更有效的"现货型"免疫疗法。该发现为实体瘤治疗提供了新思路，其揭示的PKA-CREB-CREM轴也可能适用于其他免疫细胞类型的优化改造。