甲硫氨酸脑啡肽通过调控RAW264.7细胞免疫功能抑制Nelson Bay正呼肠孤病毒感染的分子机制

本研究针对Nelson Bay正呼肠孤病毒(NBV)引发的免疫失调问题，通过RNA-Seq技术揭示甲硫氨酸脑啡肽(MENK)通过上调CCL24/IL6ST/TNFR2等细胞因子促进炎症反应，激活MHC I/II-CD28抗原呈递通路，并调控FOXO-CYCD1细胞周期途径，从而增强巨噬细胞抗病毒功能。该发现为开发抗NBV新型药物或疫苗佐剂提供了理论依据。

　　

研究背景与意义

Nelson Bay正呼肠孤病毒(NBV)作为一种人畜共患病原体，60年前首次从澳大利亚果蝠中分离，其突变株可跨越物种屏障感染人类，引发急性呼吸道和肠道炎症。尽管已知该病毒通过破坏宿主免疫功能致病，但有效干预手段仍属空白。甲硫氨酸脑啡肽(MENK)作为一种五肽内源性阿片物质，前期研究显示其能通过Toll样受体(TLR)-核因子κB(NF-κB)通路抗流感病毒，但对抗呼肠孤病毒的作用机制尚未阐明。

关键技术方法

研究采用小鼠巨噬细胞RAW264.7模型，通过预防性MENK干预后感染NBV-Miyazaki-Bali/2007株(MOI=30)。运用RNA-Seq技术分析差异表达基因(DEGs)，结合qPCR验证关键基因表达，KEGG/GO分析信号通路，并利用分子对接验证MENK与IL6ST、Syk等9个核心蛋白的相互作用。

研究结果

1. MENK浓度与病毒感染条件优化

实验确定10 mg/mL MENK为最佳干预浓度，MOI=30时巨噬细胞产生IL-1β、TNF-α等炎症因子达峰值。

2. 巨噬细胞形态与感染率变化

MENK使细胞呈梭形伪足样改变，NBV感染组细胞空泡化明显，而MENK干预组病毒感染率显著降低(P<0.01)。

3. 转录组学关键发现

筛选出3,264个DEGs(1,817上调/1,447下调)，主要富集于：

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  细胞黏附分子(ko04514): CCL24表达上调11.51倍，促进巨噬细胞趋化

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  FcγR吞噬通路(ko04666): Syk磷酸化增强2.45倍，提升病原体清除能力

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  抗原呈递通路(ko04612): MHC II和CD28分别上调2.6倍和5.16倍

  

4. 分子对接验证

MENK与FOXO-1(-6.91 kcal/mol)、CYCD1(-7.21 kcal/mol)等靶点稳定结合，证实其通过调控细胞周期发挥抗病毒作用。

结论与展望

该研究首次阐明MENK通过三重机制抗NBV感染：(1)上调CCL24/IL6ST/TNFR2招募免疫细胞；(2)增强FcγR-Syk-MHC II轴促进抗原呈递；(3)调控FOXO1-CYCD1阻滞细胞周期。特别发现MENK可诱导肠道免疫网络产生sIgA，为黏膜疫苗开发提供新思路。论文发表于《Scientific Reports》，为应对NBV潜在流行威胁提供了创新性干预策略。